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cady.gao

铁虫 (初入文坛)

[求助] T克隆连接，迟迟连接不上

小弟的载体使用自己改造过的质粒PYA4278，用AhdI酶切后露出的是T末端，载体大小为5160bp，目的片段是重叠后的产物，左臂+SPC+右臂=2568bp，使用天根的一般taq酶72℃延伸30min，16℃连接过夜，用宝生物的solutionI连接,隔天使用Ca转，所转感受态为自己制备的沙门氏菌的感受态。别人的同时做，使用同样的感受态都连接成功了，我的却迟迟连不上，不知道是什么原因，还请各位大神帮忙分析一下。
连接首先测定浓度，然后按照摩尔比1：1进行计算后添加连接，连接体系为10ul。
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1楼 2015-08-24 21:11:41
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lordsidious

铁杆木虫 (知名作家)

Dark Lord of the Sith

【答案】应助回帖

你有没有试过电转呢？非要用钙转么？
另外，其实这个限制性酶切可以跳过去的。
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May the Force be with you.
2楼2016-01-09 19:18:45
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周志惠

新虫 (小有名气)
你好，我想问下您那边有沙门氏菌感受态细胞制备的方法么？我用氯化钙法做了一次，转化质粒没有长出菌落
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3楼2017-12-22 08:26:06
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KI2018

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2019-01-02 22:57:57
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