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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 大肠杆菌培养出现严重问题，紧急求助
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feiadafeng

银虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by mazhenggen at 2015-08-23 11:40:09
首先要确定不是染菌，再研究一下是不是外源蛋白对大肠杆菌有毒性。不像是噬菌体感染

之前有重复实验，OD值以及蛋白质都达到了预期值，所以应该不是外源蛋白毒性的问题。
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11楼2015-08-25 12:06:59
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feiadafeng

银虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by huangxin2011 at 2015-08-24 08:47:50
具体的我也不清楚，因为之前课题组里面有人养菌，由于温度不对，OD在0.2~0.3测完之后急剧下降，最后变澄清了。那是25度培养，后来换成18度就对了，因为文献上是18度，当时机器坏了就选了25度。...

最近我们在诱导之后都会转移到18度，所以温度的问题可以排除了。
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12楼2015-08-25 12:07:45
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feiadafeng

银虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-08-24 09:15:41
我也遇到过这种情况，你这种现象像是溶菌了，有可能是操作或者是你用的抗生素，诱导剂污染的原因。如果说是你的蛋白对宿主有毒性，那就会全都溶菌，不会部分溶菌。另外，你提到第一种小管摇菌的现象，有可能是你的平 ...

如果是抗生素污染的话，应该同批次实验都出现相关问题，有意思的是同时做3瓶，有一瓶会出问题，三瓶虽然来自不同平板，但蛋白质都是类似体系的，不应该是毒性问题，而且用的是同一盒枪头，同一把枪，同一管抗生素与IPTG，这个似乎就很难用抗生素或者IPTG污染解释了。种子液的OD值都比较可观，所以就大量表达时种子液为假性菌的可能性也排除了。小管DH5alpha摇不起来的话，假性菌的可能性很高， 但这个是纯质粒转化BL21的种子液，摇不起来就说不过去了。我觉得有种可能性是感受态被污染了。
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13楼2015-08-25 12:13:56
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feiadafeng

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-08-24 11:05:29
我以前做蛋白表达纯化时也遇到这种情况，我的是溶菌了，注意操作（尤其是平板）

溶菌性 噬菌体感染的可能性确实可能性比较高。
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14楼2015-08-25 12:15:19
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feiadafeng

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yuhan131481 at 2015-08-25 11:28:21
典型的噬菌体污染了，把所有的瓶子用氢氧化钠侵泡，160℃高温烘烤、洗干净后再灭菌。摇床培养箱用氢氧化钠溶液擦洗之后再用酒精擦下。然后实验停止一周左右的时间。基本就好了。

84的100:1水溶液应该也比较可行吧？我们用84溶液喷洒，然后打算进行甲醛熏蒸后停两周实验。
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15楼2015-08-25 12:17:22
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jingyu501

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
16楼2015-08-25 12:28:32
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yuhan131481

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by feiadafeng at 2015-08-25 12:17:22
84的100:1水溶液应该也比较可行吧？我们用84溶液喷洒，然后打算进行甲醛熏蒸后停两周实验。...

恩  也可以的  以后注意菌液不要随便乱倒   注意下实验室空气流畅就好了。
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17楼2015-08-26 11:19:28
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读书晓知天下

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by feiadafeng at 2015-08-22 15:45:17
请问你们是怎么解决的？...

遇到过这种情况，我是重新提取质粒，重新转化新的感受态。
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18楼2017-07-07 09:39:18
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Gloriazpp

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

请问你最后是怎样处理噬菌体污染的呢，最近摇菌也是试管摇菌没有问题，一上大瓶诱导时菌长到OD0.3左右就开始裂解
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19楼2017-09-13 21:23:33
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