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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】DNA在点样孔中跑不出来 为什么?急急急急。。。。(基本解决,谢谢大家)
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
这个说不好，以前我们也遇到过，你可以重做一次，或者把模板稀释一下
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11楼2008-08-22 10:52:16
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董文娟

金虫 (小有名气)
10楼  没有提取DNA  是菌液PCR
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12楼2008-08-22 11:09:05
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lybio

金虫 (正式写手)
我在提基因组时也遇到这问题，个人觉得是蛋白没除尽，后用苯酚氯仿抽提两次后，就没出现这问题了
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13楼2008-08-23 16:11:21
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lybio

金虫 (正式写手)
菌液PCR啊，除了PCR仪95℃，5min，之前有没有用沸水浴煮5min？如果没的话，多加这步试试
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14楼2008-08-23 16:14:16
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xxwju

金虫 (小有名气)
菌液PCR不稳定，建议抽提基因组后再PCR。
对于多数原核生物，只要将新鲜菌体直接酚氯仿抽提，无水乙醇沉淀，双蒸水溶解即可。速度快的，24管可控制在30 min之内，比菌液PCR多用20 min。但PCR产物一般较多，杂质少，利于测序。
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15楼2008-08-24 08:49:44
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董文娟

金虫 (小有名气)
谢谢各位的热心解答
14楼 似乎没有煮沸  是师姐做的  但她没提有这一步
我负责跑电泳
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16楼2008-08-25 09:42:05
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ningluztt

铜虫 (小有名气)
个人认为出现这种情况可能原因：商业化的polymerase为保持酶的稳定性，会在酶中加入BSA,PCR的时候polymerase的量加的过多，也就意味着BSA的量会增加，BSA留在点样孔导致堵塞使得DNA跑不下来，我们在实验的时候出现此类情况就是这个原因。
建议：PCR时50ul体系里的酶量不要超过5U.
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17楼2008-08-25 10:41:21
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kitty-II

铜虫 (小有名气)
点样空里面的会不会是菌液的ＤＮＡ，因为太大，而没有跑出来．
而下面没看到目标带，可能是更本就没有扩出来呢？
扩大体系是一个方法，因为如果你加的菌液量比较多，而体系又太小，相对的杂质浓度就高，会影响ＤＮＡ聚合酶的扩增环境，导致扩增失败．
其实菌液ＰＣＲ不是菌液加的越多越好，如果肉眼可以看到，就已经算很多了，做分子试验有时候要靠感觉，而不是眼睛，感觉沾到了就行！
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18楼2008-08-28 16:19:22
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mythqu

新虫 (初入文坛)
是没有扩增出来吧，菌液PCR不需要煮沸的，估计你的扩增体系有问题，退火温度？你可以试试从菌液提取质粒直接做酶切鉴定插入片段。
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基因克隆
19楼2008-08-29 14:02:35
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董文娟

金虫 (小有名气)
回复 19楼
做过质粒PCR, 但大小总和目的基因不相符  或扩不出来
所以才想从菌液里扩一下   
谢谢大家
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20楼2008-08-30 16:46:35
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