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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】DNA在点样孔中跑不出来 为什么?急急急急。。。。(基本解决,谢谢大家)
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董文娟

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】DNA在点样孔中跑不出来 为什么?急急急急。。。。(基本解决,谢谢大家)

在进行菌液PCR后进行电泳，点样孔中有亮带，应该是DNA吧？ 为什么跑不下来？电压用的是200V
胶最下面有小的DNA，估计是引物二聚体。

[ Last edited by 董文娟 on 2008-8-30 at 16:47 ]
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1楼 2008-08-20 21:40:54
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ningluztt

铜虫 (小有名气)
个人认为出现这种情况可能原因：商业化的polymerase为保持酶的稳定性，会在酶中加入BSA,PCR的时候polymerase的量加的过多，也就意味着BSA的量会增加，BSA留在点样孔导致堵塞使得DNA跑不下来，我们在实验的时候出现此类情况就是这个原因。
建议：PCR时50ul体系里的酶量不要超过5U.
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17楼2008-08-25 10:41:21
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glilyq

银虫 (正式写手)
★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
是不是模板加多了？
我之前也遇到过这种情况，后来将体系加大，就没有了。具体也不没有得出什么原因。呵呵，分子试验，有时候说不明白。我当时也查了很多资料，也没有找到一个圆满的说法。你可以尝试将体系加大，模板量控制一下，少一点，试一试。还有循环数菌液PCR只需25个就够了。

[ Last edited by glilyq on 2008-8-20 at 22:14 ]
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让梦想不断向前！
2楼2008-08-20 22:05:47
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zerozhang

★
xyklmu(金币+1,VIP+0):感谢答复，积极交流
我认为是菌体没有被破坏，DNA没有溢出，比如酵母菌的壁就较厚只煮一下恐怕不行。
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4楼2008-08-21 16:51:58
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)
点样孔中的应该不是DNA啊
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6楼2008-08-21 21:01:18
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