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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：测蛋白含量时发现基因工程菌无法破壁
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su1154957

银虫 (小有名气)

[交流] 求助：测蛋白含量时发现基因工程菌无法破壁

我用的是工程菌BL21（DE3），主要是做蛋白表达。用考马斯亮蓝法测蛋白含量时发现无法破壁，我用的破壁方法是，煮沸裂解法和液氮冻融法，没有加裂解液。
      需要说明的一点是：我用的这个菌是第三次转化的了。之前第一次转化的菌非常好破壁。蛋白表达量下降后，重新提质粒再转化后，菌的细胞壁就不好破了。我现在做这个已经是第三次提质粒，再转化到宿主菌了，最近几天一直在做破壁，发现就是破不了，不知道是什么原因，有什么好的办法吗？还请各位帮帮我。
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1楼 2008-08-20 21:32:33
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复
酶解（溶菌酶）试试看，还有超声破壁法等等
要不就反复冻融多几次试试看，应该能破的，冻融法也还是比较经典简单的方法
细胞壁也不至于那么强悍……这么折腾都还不破
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3楼2008-08-20 23:50:41
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eileenjn

银虫 (小有名气)
可以尝试缩短菌体培养时间
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2楼2008-08-20 23:34:51
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
PIERCE貌似有相应的裂解液，你也可以关注下下
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-08-20 23:51:09
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