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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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su1154957

银虫 (小有名气)

[交流] 求助:测蛋白含量时发现基因工程菌无法破壁

我用的是工程菌BL21(DE3),主要是做蛋白表达。用考马斯亮蓝法测蛋白含量时发现无法破壁,我用的破壁方法是,煮沸裂解法和液氮冻融法,没有加裂解液。
      需要说明的一点是:我用的这个菌是第三次转化的了。之前第一次转化的菌非常好破壁。蛋白表达量下降后,重新提质粒再转化后,菌的细胞壁就不好破了。我现在做这个已经是第三次提质粒,再转化到宿主菌了,最近几天一直在做破壁,发现就是破不了,不知道是什么原因,有什么好的办法吗?还请各位帮帮我。
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eileenjn

银虫 (小有名气)

可以尝试缩短菌体培养时间
2楼2008-08-20 23:34:51
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复
酶解(溶菌酶)试试看,还有超声破壁法等等
要不就反复冻融多几次试试看,应该能破的,冻融法也还是比较经典简单的方法
细胞壁也不至于那么强悍……这么折腾都还不破
3楼2008-08-20 23:50:41
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
PIERCE貌似有相应的裂解液,你也可以关注下下
4楼2008-08-20 23:51:09
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