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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 总RNA提取以及琼脂糖凝胶电泳的问题（如图）
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新虫 (初入文坛)

[求助] 总RNA提取以及琼脂糖凝胶电泳的问题（如图） 已有2人参与

在提取完大鼠的肝脏的总RNA后，进行电泳验证其完整性时，结果验证如图。正常出现5s（约120bp），18s（约2000bp），28s（约5000bp）三条条带，结果却出现了四条条带，在1000bp附近多出一条。个人感觉是RNA降解的原因，但因为初次涉及分子生物的实验，想寻求一下大家是否也出现过这种情况，能否帮忙解释一下原因？这样的总RNA的完整性有保证吗，接下来的反转录扩增实验能否继续做？谢谢！！！

总RNA提取以及琼脂糖凝胶电泳的问题（如图）
第一次跑图.jpg
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1楼 2015-08-21 16:31:34
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huangxin2011

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

有可能是胶不匀，不过你的样品没有出现这种情况，所以下次你跑胶的时候把DNA marker用loading buffer稀释一下，试一试，有可能是marker在孔里不均匀
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4楼2015-08-22 08:45:39
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huangxin2011

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-21 23:06:24
肝脏、胰腺的组织含有大量的RNase，提取total RNA难免会有降解，目测就是降解的小片段RNA了。不过你这个应该不会影响后续的反转，或者real-time
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2楼2015-08-21 16:57:39
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就看看热闹

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huangxin2011 at 2015-08-21 16:57:39
肝脏、胰腺的组织含有大量的RNase，提取total RNA难免会有降解，目测就是降解的小片段RNA了。不过你这个应该不会影响后续的反转，或者real-time

还想追问一个问题，就是我这个电泳在跑DNA marker的时候，跑出来的图不直，有点波浪弯。
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3楼2015-08-21 19:09:30
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得问题不大，总RNA一般只有23s、16s、5s三条带，但这仅仅是一般情况，我之前见过小鼠肝脏的RNA竟然有多条带，开始以为自己用BIOG离心柱法提的RNA质量不过关，后来有一次看文献才无意中发现的确是多带的,你可以查查文献.
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5楼2019-03-20 14:19:27
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