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新虫 (初入文坛)

[求助] 总RNA提取以及琼脂糖凝胶电泳的问题(如图)已有2人参与

在提取完大鼠的肝脏的总RNA后,进行电泳验证其完整性时,结果验证如图。正常出现5s(约120bp),18s(约2000bp),28s(约5000bp)三条条带,结果却出现了四条条带,在1000bp附近多出一条。个人感觉是RNA降解的原因,但因为初次涉及分子生物的实验,想寻求一下大家是否也出现过这种情况,能否帮忙解释一下原因?这样的总RNA的完整性有保证吗,接下来的反转录扩增实验能否继续做?谢谢!!!

总RNA提取以及琼脂糖凝胶电泳的问题(如图)
第一次跑图.jpg
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huangxin2011

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-21 23:06:24
肝脏、胰腺的组织含有大量的RNase,提取total RNA难免会有降解,目测就是降解的小片段RNA了。不过你这个应该不会影响后续的反转,或者real-time
2楼2015-08-21 16:57:39
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就看看热闹

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by huangxin2011 at 2015-08-21 16:57:39
肝脏、胰腺的组织含有大量的RNase,提取total RNA难免会有降解,目测就是降解的小片段RNA了。不过你这个应该不会影响后续的反转,或者real-time

还想追问一个问题,就是我这个电泳在跑DNA marker的时候,跑出来的图不直,有点波浪弯。
3楼2015-08-21 19:09:30
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huangxin2011

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有可能是胶不匀,不过你的样品没有出现这种情况,所以下次你跑胶的时候把DNA marker用loading buffer稀释一下,试一试,有可能是marker在孔里不均匀
4楼2015-08-22 08:45:39
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

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我觉得问题不大,总RNA一般只有23s、16s、5s三条带,但这仅仅是一般情况,我之前见过小鼠肝脏的RNA竟然有多条带,开始以为自己用BIOG离心柱法提的RNA质量不过关,后来有一次看文献才无意中发现的确是多带的,你可以查查文献.
5楼2019-03-20 14:19:27
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