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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教：酵母菌落PCR的问题？
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zhangjie1984

铜虫 (初入文坛)

[交流] 请教：酵母菌落PCR的问题？

请教：酵母菌落PCR的问题？
      我采用的方法是：用牙签挑取一定量的菌落，使其溶于10微升水中，-70度反复冻融三次，离心取上清1微升作为模板进行PCR。
      但现在的问题是PCR的结果相当的不稳定，也就是说，在使用相同的模板的条件下，PCR的结果都很不一致，有时有PCR产物（通过电泳来看，扩增效果还可以），有时没有。重复性不高。
PS：应该不是操作方面的问题，我已经重复过很多遍了。
      所以，想请教一下高手们，是哪里出了问题？
      谢谢！
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1楼 2008-08-19 16:52:51
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jasco

木虫 (正式写手)
★
xyklmu(金币+1,VIP+0):感谢答复
我觉得是反复冻融破菌效果不稳定导致的，我记得我原来是90度水浴10min来破菌的，你试试看
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2楼2008-08-19 17:05:10
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laihx38j

禁虫 (职业作家)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
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3楼2008-08-19 17:25:14
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zhangjie1984

铜虫 (初入文坛)
好的，谢谢！
我先试一下看。
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4楼2008-08-19 20:40:43
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yuyixst

木虫 (正式写手)
100度水浴10min来破菌吧
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5楼2008-08-20 08:30:55
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wolong1984

银虫 (小有名气)
我们用的是2楼的方法！
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6楼2008-08-20 08:58:31
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zyk_527

银虫 (小有名气)
酵母菌落PCR我也总是做不好
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7楼2008-08-20 09:19:04
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康成老陈

没做过,纯支持.
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8楼2008-08-20 09:47:47
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-21 20:02
不用冻 你就直接加到你的pcr反应液中 我做过没有问题
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9楼2008-08-22 11:14:36
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micro6790

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我现在做的的是酿酒酵母的PCR，用蜗牛酶37度消化一个小时，也是做不出来。
现在要扩的片段比较大，2.3Kb。不知道楼主能给什么意见
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10楼2009-07-21 09:23:35
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