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lijianfu12

银虫 (正式写手)

[求助] 启动子克隆求助 已有1人参与

本人做了一个月克隆启动子,至今没有结果,下面是电泳图,我设计的引物条带应该是在2000bp的,求助大神有啥指教不?先谢啦!

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好好搞学术
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知是否是我电脑的问题,没看到图片。如果克隆基因组上的序列(比如你的启动子),一轮做出来的可能性不大。建议做一下巢式pcr,即在你现在引物上下游50bp左右的位置再设计一对引物。第一轮pcr做25个循环,不要跑胶,因为跟你现在的结果一样没有产物;第二轮用现在的引物做,第一轮产物一微升做模板,30个循环左右。应该就可以做出来了。希望对你有帮助。
2楼2015-08-17 23:25:34
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lijianfu12

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by junior850621 at 2015-08-17 23:25:34
不知是否是我电脑的问题,没看到图片。如果克隆基因组上的序列(比如你的启动子),一轮做出来的可能性不大。建议做一下巢式pcr,即在你现在引物上下游50bp左右的位置再设计一对引物。第一轮pcr做25个循环,不要跑胶 ...

谢谢!我可否加你!752968937

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好好搞学术
3楼2015-08-17 23:37:45
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