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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 启动子克隆求助
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lijianfu12

银虫 (正式写手)

[求助] 启动子克隆求助 已有1人参与

本人做了一个月克隆启动子，至今没有结果，下面是电泳图，我设计的引物条带应该是在2000bp的，求助大神有啥指教不？先谢啦！

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好好搞学术
1楼 2015-08-15 15:39:32
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知是否是我电脑的问题，没看到图片。如果克隆基因组上的序列（比如你的启动子），一轮做出来的可能性不大。建议做一下巢式pcr，即在你现在引物上下游50bp左右的位置再设计一对引物。第一轮pcr做25个循环，不要跑胶，因为跟你现在的结果一样没有产物；第二轮用现在的引物做，第一轮产物一微升做模板，30个循环左右。应该就可以做出来了。希望对你有帮助。
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2楼2015-08-17 23:25:34
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by junior850621 at 2015-08-17 23:25:34
不知是否是我电脑的问题，没看到图片。如果克隆基因组上的序列（比如你的启动子），一轮做出来的可能性不大。建议做一下巢式pcr，即在你现在引物上下游50bp左右的位置再设计一对引物。第一轮pcr做25个循环，不要跑胶 ...

谢谢！我可否加你！752968937

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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好好搞学术
3楼2015-08-17 23:37:45
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