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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助为什么PAGE电泳条带大小和估计的蛋白分子量不一致
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

[交流] 求助为什么PAGE电泳条带大小和估计的蛋白分子量不一致

我在做蛋白的表达纯化，用pET32a载体，但是每次试表达时PAGE电泳的条带都比根据氨基酸数目估计的大十几KD，不知为什么？
我的蛋白是32KD，可是每次的条带都在45左右。另外，做了对照也发现45KD的蛋白确实是诱导后表达。

[ Last edited by xyklmu on 2008-8-19 at 04:22 ]
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1楼 2008-08-18 10:57:18
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jasco

木虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
trx融和蛋白的啊
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2楼2008-08-18 11:34:10
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复，积极交流
帮你查了一下
pET32a-LIC Vector
pET32a-LIC vector map
T7 promoter 5121-5137
N-terminal tag 5209-5688
Trx-tag coding sequence 5209-5535
His-tag coding sequence 5557-5574
S-tag coding sequence 5608-5652
N-terminal cloning site 5674-5688
C-terminal cloning site 7704-7718
T7 terminator 7818-7864
f1 origin 12-467
bla coding sequence 599-1456
pBR322 origin 2217
lacI coding sequence 3651-4730
sacB coding sequence 6210-7628
N – terminal fusion sequence
MSDKIIHLTDDSFDTDVLKADGAILVDFWAEWCGPCKMIAPILDEIADEYQGKLTVAKLNIDQNPGTAPKYGIRGIPTLLLFKNGEVAATKVGALSKGQLKEFLDANLAGSGSGHMHHHHHHSSGLVRGSGMKETAAAKFERQHMDSPDLGTENLYFQS

Trx-tag： 105aa

加上你的32KD，大小在45KD正常
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3楼2008-08-18 12:56:05
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qfzhang

银虫 (小有名气)
★
xyklmu(金币+1,VIP+0):感谢答复，积极交流
磷酸化和糖链的修饰也会造成分子量的差异，如果是page而不是sds-page的话，迁移距离还和电荷分子形状相关。
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4楼2008-08-18 13:16:12
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

谢谢

谢谢chysx6 ！我深以为然。不知怎样才能把金币给你？不好意思，我是新手
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5楼2008-08-18 13:17:17
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

谢谢！

谢谢啊，受益匪浅！只是金币如何转啊？
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6楼2008-08-18 17:22:43
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
呵呵，大家互相交流

斑主自然会按功行赏的
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7楼2008-08-18 18:08:56
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yqhc

金虫 (小有名气)
★
xyklmu(金币+1,VIP+0):感谢答复，积极交流
不能只根据PAGE判断蛋白的分子量，很不准确，比理论值高是很正常的现象，在Pichia.表达体系中，多倍体也很常见。
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8楼2008-08-18 22:33:03
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

请教

原核中的蛋白也会有糖基化和磷酸化修饰吗？
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9楼2008-08-19 00:11:43
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superwheat

银虫 (正式写手)
★
xyklmu(金币+1,VIP+0):感谢答复，积极交流
不会的，原核表达不会有翻译后修饰的
引用回帖:
Originally posted by xuehu2008 at 2008-8-19 00:11:
原核中的蛋白也会有糖基化和磷酸化修饰吗？

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10楼2008-08-19 00:46:06
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