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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求实验室环境中噬菌体鉴定方法
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jinshengfang

木虫 (正式写手)

[求助] 求实验室环境中噬菌体鉴定方法 已有2人参与

实验室BL21（DE3）染噬菌体，后来实验室经过甲醛熏蒸，求甲醛熏蒸效果及实验室环境中噬菌体鉴定方法
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生物催化
1楼 2015-08-12 16:59:03
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csyhaoge

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by caoqingqing at 2016-03-24 09:12:13
您好！
请问地衣芽孢杆菌未知温和噬菌体（不知道怎么检测），怎么找到敏感菌？谢谢！...

你好~
最直观的常规检测噬菌体的方法是双层平板法，因为涉及到是温和噬菌体，其在双层平板上一般不会形成噬菌斑。为使温和噬菌体转化为裂性，一般会采取改变外界培养条件或是人为的加入化学制剂（具体是哪几种我记得不是很清楚了）、物理因子（最常用的是紫外线照射）对其进行刺激，从而使溶原性转化为烈性。
关于紫外线诱发溶原性噬菌体的转化过程，你可以参照中国典型培养物保藏中心（http://www.cctcc.org/news_show1.php?newsid=79）关于λ噬菌体的敏感菌株CCTCC AB 2013330的介绍，该网页上有一个PDF格式的文档，其中详细的说明了该实验步骤~
对于某一类的温和噬菌体，大多数的该类宿主均为敏感株，但具体的可能还需要你进一步的实验检测和验证。
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7楼2016-05-27 01:55:02
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jinshengfang: 金币+5, ★★★很有帮助, 没办法了，公司不可能让我们一段时间不做菌的 2015-08-13 13:16:58
你们这够狠，我们染噬菌体后就没怎么处理，尽量不养菌，过一段时间就好了。。。具体的鉴定方法，期待高人解答
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2楼2015-08-13 08:52:24
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csyhaoge

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jinshengfang: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢 2015-08-13 17:07:00
zhang8826857: 金币+5, MicEPI+1, 鼓励应助，回答的很详细 2015-08-13 20:42:15
一般情况下，空气中噬菌体的含量还是很少，一般不足以造成染噬菌体情况的发生。但实验室若长期做某一种菌的实验，或实验室有在做噬菌体相关实验的话，实验室环境中噬菌体含量升高，就会造成噬菌体污染情况的发生。
特别是对于发酵工业生产，噬菌体污染是一个常见且负责的问题，至今还没有完美的解决方法，只能是采取措施来防治。常见的噬菌体污染防治措施有：
1、防止噬菌体的入侵和蔓延
为防止噬菌体的污染，一定要保持实验室环境的清洁，对实验常用到的设备、器皿、材料等进行灭菌处理，对实验菌种进行妥善的保存等。
2、选用抗噬菌体突变株
当然了，这一方法成本较高，一般实验室选用不了。
3、噬菌体爆发后采取措施进行防治
用次氯酸钠将房间整个清洁消毒，所有器具高温灭菌或用次氯酸钠浸泡。
地面用量：有效氯浓度2500ppm，大于30min； 器具：有效氯浓度500ppm，20min。摇床用甲醛加高锰酸钾熏蒸，用前再用紫外照射半小时； 发酵罐高温灭菌。
如果空气中噬菌体浓度也较高的话，可以用甲醛熏蒸，3g/平米；或用紫外照射，但要注意，因为这两种方法都可能对仪器造成腐蚀。
空气中噬菌体的检测：双层平板法，下层是生产菌或敏感菌的培养基，上层是营养肉汤软琼脂，双层琼脂板开盖放30min，30度培养过夜。看有无噬菌斑。
当然了，这一方法适合空气中噬菌体浓度较高的情况。如空气中噬菌体浓度一般，建议可先用空气抽滤器，之后将吸附于膜上的物质用适量的缓冲液洗脱，双层平板法检测洗脱液中噬菌体的量即可。
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3楼2015-08-13 13:18:04
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jinshengfang

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by csyhaoge at 2015-08-13 13:18:04
一般情况下，空气中噬菌体的含量还是很少，一般不足以造成染噬菌体情况的发生。但实验室若长期做某一种菌的实验，或实验室有在做噬菌体相关实验的话，实验室环境中噬菌体含量升高，就会造成噬菌体污染情况的发生。
...

看来是高手呀
我还想请教您一下，如果我需要做溶源菌检测试验，因为现在实验室老染噬菌体，都不知道是种子里就带了噬菌体还是环境中的。
我查了一下说溶源菌用平板来做噬菌斑实验，其中需要敏感菌，那这个敏感菌一般是什么菌了。
我们实验室做的重组BL21（DE3）菌
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生物催化
4楼2015-08-13 17:10:00
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