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jinshengfang木虫 (正式写手)
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[求助]
求实验室环境中噬菌体鉴定方法 已有2人参与
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| 实验室BL21（DE3）染噬菌体，后来实验室经过甲醛熏蒸，求甲醛熏蒸效果及实验室环境中噬菌体鉴定方法 |
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csyhaoge
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
jinshengfang: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢 2015-08-13 17:07:00
zhang8826857: 金币+5, MicEPI+1, 鼓励应助，回答的很详细 2015-08-13 20:42:15
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zhang8826857: 金币+5, MicEPI+1, 鼓励应助，回答的很详细 2015-08-13 20:42:15
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一般情况下，空气中噬菌体的含量还是很少，一般不足以造成染噬菌体情况的发生。但实验室若长期做某一种菌的实验，或实验室有在做噬菌体相关实验的话，实验室环境中噬菌体含量升高，就会造成噬菌体污染情况的发生。 特别是对于发酵工业生产，噬菌体污染是一个常见且负责的问题，至今还没有完美的解决方法，只能是采取措施来防治。常见的噬菌体污染防治措施有： 1、防止噬菌体的入侵和蔓延 为防止噬菌体的污染，一定要保持实验室环境的清洁，对实验常用到的设备、器皿、材料等进行灭菌处理，对实验菌种进行妥善的保存等。 2、选用抗噬菌体突变株 当然了，这一方法成本较高，一般实验室选用不了。 3、噬菌体爆发后采取措施进行防治 用次氯酸钠将房间整个清洁消毒，所有器具高温灭菌或用次氯酸钠浸泡。 地面用量：有效氯浓度2500ppm，大于30min； 器具：有效氯浓度500ppm，20min。摇床用甲醛加高锰酸钾熏蒸，用前再用紫外照射半小时； 发酵罐高温灭菌。 如果空气中噬菌体浓度也较高的话，可以用甲醛熏蒸，3g/平米；或用紫外照射，但要注意，因为这两种方法都可能对仪器造成腐蚀。 空气中噬菌体的检测：双层平板法，下层是生产菌或敏感菌的培养基，上层是营养肉汤软琼脂，双层琼脂板开盖放30min，30度培养过夜。看有无噬菌斑。 当然了，这一方法适合空气中噬菌体浓度较高的情况。如空气中噬菌体浓度一般，建议可先用空气抽滤器，之后将吸附于膜上的物质用适量的缓冲液洗脱，双层平板法检测洗脱液中噬菌体的量即可。 |
3楼2015-08-13 13:18:04
a86052
金虫 (正式写手)
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2楼2015-08-13 08:52:24
jinshengfang
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4楼2015-08-13 17:10:00
csyhaoge
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【答案】应助回帖
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jinshengfang: 金币+25, ★★★★★最佳答案, 非常感谢，多多交流 2015-09-02 14:29:04
jinshengfang: 金币+25, ★★★★★最佳答案, 非常感谢，多多交流 2015-09-02 14:29:04
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你好！因为前一段时间一直在忙着写文章，就没有及时的回复你，不好意思哈~ 敏感菌，特别是针对噬菌体的敏感菌，通俗的说，就是能被某一种或某一类噬菌体侵染、裂解的菌株，如你们实验室用到的大肠杆菌BL21（DE3），根据我们实验室做出的结果看，该菌对烈性噬菌体均敏感（即烈性噬菌体都可以使之裂解），也就是说大肠杆菌BL21（DE3）可以作为检测烈性噬菌体的敏感性菌株。 另外，本着试验严谨的态度，溶原性噬菌体在某些外界环境发生变化时也会转化为裂解性噬菌体，最常见的就是λ噬菌体了。假如你需要检测λ噬菌体的话，呵呵，还真是蛮巧的，前一段时间因实验需要我刚找到了λ噬菌体的敏感菌株。该菌株标号CCTCC AB 2013330（λ噬菌体敏感菌株），该菌株可在中国典型培养物保藏中心（http://www.cctcc.org/news_show1.php?newsid=79）找到，我问过，价钱也不贵，需要的话，你可以从该保藏中心购买。 之前看过并回复过你发的帖子，综合你提起的问题，我怀疑你们实验室的噬菌体污染来自环境中，详细解答见之前回复过你的帖子。 最后多说一句哈，我不是高手，只是一个从事噬菌体方面相关研究的研究生，还在进一步的学习之中，毕竟学无止境，我离高手这个称呼还早得很，希望能多多的交流~ 希望我的回答能对你的实验有所帮助~ |
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caoqingqing5楼2015-08-27 01:29:07
caoqingqing
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6楼2016-03-24 09:12:13
csyhaoge
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你好~ 最直观的常规检测噬菌体的方法是双层平板法，因为涉及到是温和噬菌体，其在双层平板上一般不会形成噬菌斑。为使温和噬菌体转化为裂性，一般会采取改变外界培养条件或是人为的加入化学制剂（具体是哪几种我记得不是很清楚了）、物理因子（最常用的是紫外线照射）对其进行刺激，从而使溶原性转化为烈性。 关于紫外线诱发溶原性噬菌体的转化过程，你可以参照中国典型培养物保藏中心（http://www.cctcc.org/news_show1.php?newsid=79）关于λ噬菌体的敏感菌株CCTCC AB 2013330的介绍，该网页上有一个PDF格式的文档，其中详细的说明了该实验步骤~ 对于某一类的温和噬菌体，大多数的该类宿主均为敏感株，但具体的可能还需要你进一步的实验检测和验证。 |
7楼2016-05-27 01:55:02
