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匿名

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rdfu510

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
hibi: 金币+10 2015-08-12 16:22:58
引用回帖:
18楼: Originally posted by hibi at 2015-08-12 15:39:10
1  目前正在筛选真阳性克隆  所以没有真阳性(插入片断DNA)对照PCR
2.之前做过空载体进行转化 长出的也是白斑跟现在连接目的片段转化后长出的白斑都一样的 没办法分辨的 而且我的载体是不能做蓝白班筛选的
3,目 ...

1. 知道你还在克隆真阳性克隆。我指的是用目的片段DNA作PCR模版对照。
2. 你的载体质粒DNA制备,用双酶切后有作脱磷处理以防止自环化联结产生假阳性克隆吗? 如无,可试增此步骤。
3. 你的Taq pol PCR产物,可稀释后用作茵液PCR阳性模板对照。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
19楼2015-08-12 16:09:41
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
菌液PCR不带这么玩的,pfu做菌液PCR,楼主真是土豪啊,效果未必好,RNA都不搞干净,酶切就算了吧

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-08-11 18:09:43
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匿名

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3楼2015-08-11 19:19:15
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lijianfu12

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
菌液pcr不用煮,直接加进去!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
好好搞学术
4楼2015-08-11 23:22:27
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