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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » Qpcr 溶解曲线好诡异
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voefeifei

铁虫 (初入文坛)

[求助] Qpcr 溶解曲线好诡异 已有2人参与

首先说下我p的模板用的是CDNA，产物应该是150~200bp， p了20多个，10多个是正常的溶解曲线，还有一些是不正常的，然后p完之后溶解曲线如下

Qpcr  溶解曲线好诡异
]{[3QGOJCNN31EZ{SH8O{JT.png


Qpcr  溶解曲线好诡异-1
5PHY2TO8731@(W7(HUK3[4L.png


Qpcr  溶解曲线好诡异-2
IJY9J50_P5BW2D%L6[W6}C6.png
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1楼 2015-08-10 19:38:13
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voefeifei

铁虫 (初入文坛)
大家给个建议和意见啊 ，我需要你们啊 自顶！！！
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2楼2015-08-10 20:02:12
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jinxuan0904

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
voefeifei: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 没有什么金币，但是还要意思下的， 2015-08-11 14:19:38
引物不行吧！你做把普通PCR看看，是不是有非特异性扩增啊！
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3楼2015-08-11 09:47:21
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voefeifei

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jinxuan0904 at 2015-08-11 09:47:21
引物不行吧！你做把普通PCR看看，是不是有非特异性扩增啊！

qpcr的结果取了1ul然后普通pcr了下，跑了下电泳图
Qpcr  溶解曲线好诡异-3
P50811-141824.jpg
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4楼2015-08-11 14:23:46
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jinxuan0904

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by voefeifei at 2015-08-11 14:23:46
qpcr的结果取了1ul然后普通pcr了下，跑了下电泳图

P50811-141824.jpg
...

怎么都是弥散啊！引物不行吧！
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5楼2015-08-11 14:25:03
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voefeifei

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jinxuan0904 at 2015-08-11 14:25:03
怎么都是弥散啊！引物不行吧！...

但是有几个据说是以前有人文章里发过可以p出来但是引物是我们自己设计的，最后个是actin  可以p出来
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6楼2015-08-11 14:29:06
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jinxuan0904

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by voefeifei at 2015-08-11 14:29:06
但是有几个据说是以前有人文章里发过可以p出来但是引物是我们自己设计的，最后个是actin  可以p出来...

以前文章的引物不能用啊，不同的体系，不同的条件，不同的仪器，不同的厂家合成的引物，这么多不定的因素，怎么能用呢？
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7楼2015-08-11 14:31:34
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voefeifei

铁虫 (初入文坛)
自顶
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8楼2015-08-12 09:09:18
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i65536

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这些扩不出来的cDNA其它引物能扩得出来么？如果其它引物的话建议重新设计下引物，可能是特异性不够好
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我为何这么傻？
9楼2015-08-14 10:49:10
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voefeifei

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by i65536 at 2015-08-14 10:49:10
这些扩不出来的cDNA其它引物能扩得出来么？如果其它引物的话建议重新设计下引物，可能是特异性不够好

可以扩出  actin      其他的能扩出几个来但非常浅的条带
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10楼2015-08-18 17:27:05
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