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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 如何提取革兰氏阳性菌导入的重组质粒？
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zj251989

新虫 (小有名气)

[求助] 如何提取革兰氏阳性菌导入的重组质粒？ 已有2人参与

大家早上好：
         实验处处是问题啊！！！最近电转化革兰氏阳性菌，无法提取重组质粒来验证和检验，哪位大神知道如何提取革兰氏阳性菌重组质粒的方法？

我前几天加了溶菌酶，基本没有什么效果。。。。。。
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1楼 2015-08-10 08:12:01
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zj251989

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liygmail at 2015-08-10 12:47:07
先用溶菌酶破壁处理，
后续操作按照大肠杆菌质粒提取即可

我用溶菌酶破不了壁，时间从几小时到几天都有，还是无法破壁
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4楼2015-08-11 14:21:48
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普通回帖

biosci

捐助贵宾 (知名作家)
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好提啊，我们经常提

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2015-08-10 08:29:40
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liygmail

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zj251989: 金币+2, ★有帮助 2015-08-11 14:20:48
先用溶菌酶破壁处理，
后续操作按照大肠杆菌质粒提取即可
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3楼2015-08-10 12:47:07
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zj251989

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2015-08-10 08:29:40
好提啊，我们经常提

你们是用试剂盒提的吗?
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5楼2015-08-11 14:22:17
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liygmail

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by zj251989 at 2015-08-11 14:21:48
我用溶菌酶破不了壁，时间从几小时到几天都有，还是无法破壁...

溶菌酶如果没有变质失效，30分钟-2小时37度水浴应该就能处理好，
还有，要注意溶菌酶不宜反复冻融，最好现用现配，用TE溶解。
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6楼2015-08-11 20:45:34
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liyongliangx

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liygmail at 2015-08-11 20:45:34
溶菌酶如果没有变质失效，30分钟-2小时37度水浴应该就能处理好，
还有，要注意溶菌酶不宜反复冻融，最好现用现配，用TE溶解。...

问下，加入重悬溶液 250ul之后，我应该加入多少体积的溶菌酶？一般配溶菌酶时浓度应该多少？
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7楼2015-08-20 13:14:53
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wanglei512

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

估计你的宿主菌用的代数太多了，做感受态要用最原始的菌株，提出来的质粒跑胶拖尾现象严重，甚至看不到质粒带，就是一片，但应该可以做PCR鉴定   溶菌酶在加solutionI时一起加入就行，固体液体都可以，固体的加火柴头大小就可以了很省事
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8楼2015-08-20 15:59:57
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远飞的鸟儿

新虫 (初入文坛)
您好  请问您做革兰氏阳性菌电转化的体系是什么呀  我最近在做芽孢杆菌的电转化  怎么也转不成功？
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9楼2017-04-05 15:37:10
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xinxinjin

银虫 (知名作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2015-08-10 08:29:40
好提啊，我们经常提

你好前辈，请问你怎么提的
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10楼2019-07-02 18:53:26
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