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汕头大学海洋科学接受调剂
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zj251989

新虫 (小有名气)

[求助] 如何提取革兰氏阳性菌导入的重组质粒? 已有2人参与

大家早上好:
         实验处处是问题啊!!!最近电转化革兰氏阳性菌,无法提取重组质粒来验证和检验,哪位大神知道如何提取革兰氏阳性菌重组质粒的方法?

我前几天加了溶菌酶,基本没有什么效果。。。。。。
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zj251989

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by liygmail at 2015-08-10 12:47:07
先用溶菌酶破壁处理,
后续操作按照大肠杆菌质粒提取即可

我用溶菌酶破不了壁,时间从几小时到几天都有,还是无法破壁
4楼2015-08-11 14:21:48
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普通回帖

biosci

捐助贵宾 (职业作家)


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好提啊,我们经常提

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-08-10 08:29:40
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liygmail

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zj251989: 金币+2, 有帮助 2015-08-11 14:20:48
先用溶菌酶破壁处理,
后续操作按照大肠杆菌质粒提取即可
3楼2015-08-10 12:47:07
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zj251989

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2015-08-10 08:29:40
好提啊,我们经常提

你们是用试剂盒提的吗?
5楼2015-08-11 14:22:17
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liygmail

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by zj251989 at 2015-08-11 14:21:48
我用溶菌酶破不了壁,时间从几小时到几天都有,还是无法破壁...

溶菌酶如果没有变质失效,30分钟-2小时37度水浴应该就能处理好,
还有,要注意溶菌酶不宜反复冻融,最好现用现配,用TE溶解。
6楼2015-08-11 20:45:34
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liyongliangx

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by liygmail at 2015-08-11 20:45:34
溶菌酶如果没有变质失效,30分钟-2小时37度水浴应该就能处理好,
还有,要注意溶菌酶不宜反复冻融,最好现用现配,用TE溶解。...

问下,加入重悬溶液 250ul之后,我应该加入多少体积的溶菌酶?一般配溶菌酶时浓度应该多少?
7楼2015-08-20 13:14:53
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wanglei512

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

估计你的宿主菌用的代数太多了,做感受态要用最原始的菌株,提出来的质粒跑胶拖尾现象严重,甚至看不到质粒带,就是一片,但应该可以做PCR鉴定   溶菌酶在加solutionI时一起加入就行,固体液体都可以,固体的加火柴头大小就可以了很省事
8楼2015-08-20 15:59:57
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远飞的鸟儿

新虫 (初入文坛)

您好  请问您做革兰氏阳性菌电转化的体系是什么呀  我最近在做芽孢杆菌的电转化  怎么也转不成功?
9楼2017-04-05 15:37:10
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xinxinjin

银虫 (职业作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2015-08-10 08:29:40
好提啊,我们经常提

你好前辈,请问你怎么提的
10楼2019-07-02 18:53:26
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