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panshuqin

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助有关线粒体的问题 已有2人参与

求助:有没有测定过组织线粒体中的ROS和蛋白浓度的呢?目前准备测定组织线粒体中的ROS和蛋白浓度,是不是直接拿试剂盒来提取线粒体,然后用裂解液来裂解线粒体,测定裂解液中的ROS和蛋白浓度   请各位大仙多多指教!!!!
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多多指教
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
顺序反了吧,应该是现测蛋白浓度,然后测ROS吧。我没测过ROS还,但感觉是先测蛋白浓度

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2015-08-10 13:42:13
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panshuqin

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by ericyo918 at 2015-08-10 13:42:13
顺序反了吧,应该是现测蛋白浓度,然后测ROS吧。我没测过ROS还,但感觉是先测蛋白浓度

个人觉得没有什么影响吧!弱弱地问一句:您有测过线粒体中的其它指标(比如NO,过氧化氢等)吗?
多多指教
3楼2015-08-10 15:22:05
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by panshuqin at 2015-08-10 16:22:05
个人觉得没有什么影响吧!弱弱地问一句:您有测过线粒体中的其它指标(比如NO,过氧化氢等)吗?...

这个还没有。我觉得先统一线粒体量,测出来的才精确吧。我测过线粒体活性和线粒体蛋白的表达,那些指标还没搞过,不过会搞得。应该会有相关试剂盒测吧。
4楼2015-08-10 15:49:18
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twtanaps

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ericyo918 at 2015-08-10 15:49:18
这个还没有。我觉得先统一线粒体量,测出来的才精确吧。我测过线粒体活性和线粒体蛋白的表达,那些指标还没搞过,不过会搞得。应该会有相关试剂盒测吧。...

你好!请问线粒体提出来后可以冻起来,再测活性吗?还有膜电位,膜流动性,细胞色素?谢谢
5楼2015-10-13 00:24:48
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

可以,不过要-80保存

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6楼2015-10-13 00:33:38
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陈陈陈123

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ericyo918 at 2015-10-13 00:33:38
可以,不过要-80保存

想请教您一个问题,我想测定组织中线粒体的酶活性,需要用试剂盒提取线粒体么?还是直接将组织制成线粒体蛋白悬液?刚刚开始实验,很多不明白,请教一下,谢谢。
7楼2015-11-27 15:47:34
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 陈陈陈123 at 2015-11-27 16:47:34
想请教您一个问题,我想测定组织中线粒体的酶活性,需要用试剂盒提取线粒体么?还是直接将组织制成线粒体蛋白悬液?刚刚开始实验,很多不明白,请教一下,谢谢。...

最好是把线粒体提出来测复合物酶活,我没做过全蛋白测酶活的,有些文献里也有这样做的

发自小木虫IOS客户端
8楼2015-11-28 00:44:47
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陈陈陈123

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by ericyo918 at 2015-11-28 00:44:47
最好是把线粒体提出来测复合物酶活,我没做过全蛋白测酶活的,有些文献里也有这样做的
...

还想请教一下,我看一般提取线粒体都需要超声波破碎,有没有其他方法可以替代呢?

发自小木虫IOS客户端
9楼2015-11-28 15:48:50
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 陈陈陈123 at 2015-11-28 16:48:50
还想请教一下,我看一般提取线粒体都需要超声波破碎,有没有其他方法可以替代呢?
...

超声是破坏线粒体膜吧,线粒体膜inside out,应该是在提取玩线粒体以后吧,这步不能省。要不打死也做不出来,提线粒体是蔗糖梯度法提,不需要超声吧
10楼2015-11-29 13:19:27
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