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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 双酶切部分重叠 能不能这样做 希望大家帮帮忙
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JDSW

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切部分重叠 能不能这样做 希望大家帮帮忙 已有2人参与

如载体部分图示是否能够先用Pst1酶切再用EcoR1酶切  希望大家能够解答一下 查了一下保护碱基觉得没有问题 但一直是空载体

双酶切部分重叠 能不能这样做 希望大家帮帮忙
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@no1xiaowu @biostar2009

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1楼 2015-08-09 11:29:57
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JDSW

新虫 (初入文坛)
怎么没有人回复呢  帮帮忙啦  指点迷津

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2楼2015-08-09 15:05:50
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
3楼2015-08-09 19:02:01
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JDSW

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ghqiu09 at 2015-08-09 19:02:01
最好不要，有可能效率不高

但是保护碱基条件都适合啊  那可怎么办

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4楼2015-08-09 20:40:45
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ppppppppp

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以先用这两个酶切了试试。酶切之后纯化，让他自连，如果长出很多的话就换酶切位点。如果不是很多，建议酶切之后去磷酸化。如果很少，恭喜，双酶切可行。
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初来乍到，请多指教
5楼2015-08-09 20:48:43
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JDSW

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ppppppppp at 2015-08-09 20:48:43
你可以先用这两个酶切了试试。酶切之后纯化，让他自连，如果长出很多的话就换酶切位点。如果不是很多，建议酶切之后去磷酸化。如果很少，恭喜，双酶切可行。

先用Pst酶切再用EcoR酶切之后磷酸化再加链接酶转化看酶切效果是吧

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6楼2015-08-09 21:00:34
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JDSW

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ppppppppp at 2015-08-09 20:48:43
你可以先用这两个酶切了试试。酶切之后纯化，让他自连，如果长出很多的话就换酶切位点。如果不是很多，建议酶切之后去磷酸化。如果很少，恭喜，双酶切可行。

先用Pst酶切再用EcoR酶切之后磷酸化再加链接酶转化看酶切效果是吧

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7楼2015-08-09 21:01:53
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
8楼2015-08-09 23:26:22
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