应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为啥蜡块提取出来的RNA做为模板做出来的熔解曲线没有新鲜组织的干净
31/1返回列表
查看: 1899  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

linzshit

银虫 (小有名气)

[求助] 为啥蜡块提取出来的RNA做为模板做出来的熔解曲线没有新鲜组织的干净 已有1人参与

现在小弟在做蜡块组织mRNA表达量的试验，得出了一个比较神奇的结果，因为蜡块组织比较有限而且提取RNA浓度低，所以开始设计实验验证扩增效率的时候都是用的新鲜组织提出来的RNA转成的cDNA，用这个时在Ct=31左右的时候熔解曲线一直是一个峰，但是差不多同样的Ct值，蜡块组织提出来的RNA转cDNA为模板的熔解曲线就是两个峰，阴性虽然抬起，但峰位置也不是那里，求大神解答。

为啥蜡块提取出来的RNA做为模板做出来的熔解曲线没有新鲜组织的干净
1.png
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-08-07 16:05:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

timmy1028

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
RNase是广泛存在于环境中的，这个相信你是知道的，石蜡肯定不是RNase free的；
石蜡包埋的过程经过高温，高温对于保存RNA不利；
检测RNA是否降解的指标不是A260/A280，而是跑电泳看5S降解带是否明显，28S／18S是否正确；
你的这个结果，明显是RNA降解了。以后在转cDNA前，要先电泳检测RNA是否降解严重
赞一下 回复此楼
2楼2015-08-08 02:51:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linzshit

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by timmy1028 at 2015-08-08 02:51:14
RNase是广泛存在于环境中的，这个相信你是知道的，石蜡肯定不是RNase free的；
石蜡包埋的过程经过高温，高温对于保存RNA不利；
检测RNA是否降解的指标不是A260/A280，而是跑电泳看5S降解带是否明显，28S／18S是否 ...

这个倒是我也考虑到了,可是降解了以后反转录的cDNA模板在后期的PCR中就不会对数扩增了吧，这个峰还是挺高的，而且我跑电泳也是两条带。这个是我一直想不明白的事情。
赞一下 回复此楼
3楼2015-08-10 17:31:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 linzshit 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 5/250 2026-08-08 17:02 by oEVWOejN9taj
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:22 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:19 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:02 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 15:59 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 WQyTGMbfH7Cx 2026-08-07 4/200 2026-08-08 15:02 by oEVWOejN9taj
[基金申请] fileCode有新解读？ +9 Tide man 2026-08-08 17/850 2026-08-08 14:56 by archvillain
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +5 布布和一二 2026-08-08 8/400 2026-08-08 14:54 by archvillain
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:22 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +11 且听虎啸 2026-08-07 14/700 2026-08-08 12:50 by 布布和一二
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 10:19 by 3OOjAIS77qg2
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭