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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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deity214

铁虫 (小有名气)

[交流] 请教:RT-PCR的条带跑不开是什么原因?

RT-PCR的条带跑不开是什么原因?

1.2%的琼脂糖凝胶
目的条带514bp
[search]RT-PCR[/search]

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-12 at 09:13 ]
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deity214

铁虫 (小有名气)

染料加得不够就条带很淡,或者是胶太烫就加了染料分解了,要不然就是暴光参数没设好

溴化乙靛是5%的,曝光参数怎么设?

我这里是300nm紫外线灯看
5楼2008-08-15 16:20:44
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deity214

铁虫 (小有名气)

请大家分析一下这张电泳图可能出问题的地方

目的条带是扩增出来了,可是图太难看了,怎样改善一下?

1、为何每个条带都是两边浓,中间淡?
2、marker量我是加了2ul,有点淡
3、目的条带514bp,用多少的marker合适?我左边的是100bp ladder,右边是50bp ladder

谢了先!
2楼2008-08-15 13:15:30
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
这个条带的分离还可以啦~~你要想跑开一点就胶做浓一点
染料加得不够就条带很淡,或者是胶太烫就加了染料分解了,要不然就是暴光参数没设好
问题1、上样没上好,分布不均匀~~~梳子太宽了,建议用薄梳子。要不然,上样的时候就小心一点,均匀地往孔里头加。
2、一般我都用5ul
3、100bp可以了~~~反正又500和514在这么稀的胶其实是差不多的
3楼2008-08-15 14:36:59
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deity214

铁虫 (小有名气)

多谢多谢,回去再跑跑试试
4楼2008-08-15 16:18:35
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