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米可儿come

木虫 (正式写手)

[求助] 关于牛血清蛋白浓度测定的问题已有2人参与

我高分子材料专业的,在做一些抗蛋白吸附的材料,在具有微孔的聚偏氟乙烯膜表面镀上亲水的coating,可以起到抗蛋白吸附的作用。在性能测试的过程中,我配制了1mg/ml 的牛血清蛋白溶液(BSA溶液),并绘制了BSA的标准曲线,用的是紫外分光光度法测的蛋白浓度,波长设置的是280nm。然后我将我测材料放在1mg/ml 的BSA溶液中浸泡并轻微振荡,保持24h,温度为室温 30℃,然后测溶液中蛋白的浓度,但结果发现测得的浓度均大于初始浓度,不是偶然,已经做了很多组实验,目前我排除了多个可能导致吸光度增大的因素,如coating在浸泡过程中有溶出物增加吸光度,和基底材料中溶出物,以及亲水镀层吸水使溶液浓缩,但是这些经实验和论证后均不成立,是不是问题出在蛋白本身上,我查资料BSA保存需冷藏,不知道30℃放置24h会不会导致蛋白变性,变性会导致吸光度增加吗

有对这方面了解的请帮我指点一下,这个问题已经困扰了我很久,接下来的实验不知道该怎么办了
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syhzlsd

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
米可儿come: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-08-18 10:40:50
30度,24h,这个温度太高,BSA应该不会变性,但是应该会降解,降解的话,蛋白吸光值会变大。另外用G-250法测浓度应该比测280精确很多!
12楼2015-08-18 10:05:56
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米可儿come

木虫 (正式写手)

给自己顶一下
2楼2015-08-08 22:19:23
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米可儿come

木虫 (正式写手)

3楼2015-08-08 22:19:45
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米可儿come

木虫 (正式写手)

拜托帮帮忙
4楼2015-08-08 22:20:13
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米可儿come

木虫 (正式写手)

5楼2015-08-08 22:20:42
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)


米可儿come: 金币+1 2015-08-11 10:23:14
本帖内容被屏蔽

6楼2015-08-09 23:37:00
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)


米可儿come: 金币+1, 有帮助 2015-08-18 10:41:42
本帖内容被屏蔽

7楼2015-08-09 23:37:36
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米可儿come

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ghqiu09 at 2015-08-09 23:37:00
一般我们测蛋白浓度都是用考染方法测的,还有,如果你要测280的光吸收,你必须用石英比色皿,否则OD值肯定大,因为普通的玻璃比色皿在紫外波段是有光吸收的。考染是测OD595,玻璃就行

我用的是石英比色皿,我看过类似做这个材料蛋白的吸附的都是用的这种方法,选择280nm紫外测试。
8楼2015-08-11 10:24:31
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米可儿come

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by ghqiu09 at 2015-08-09 23:37:36
你自己百度蛋白浓度测定方法,考染,BCA等等,很多选择

我用这个方法主要是觉得比较简单方便,我不是专业生物方向,这个数据也不作为主要数据,所以只要有大致的趋势就可以,不需要特别精准的要求,如果以这个为前提,这个方法可不可行,如果不可行,我的问题应该出在哪里呢,如果我配制溶液的水不是超纯水会不会对蛋白质的性质影响很大
9楼2015-08-11 10:26:58
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)


米可儿come: 金币+1 2015-08-18 10:42:06
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10楼2015-08-11 11:42:20
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