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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 关于牛血清蛋白浓度测定的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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米可儿come

木虫 (正式写手)

[求助] 关于牛血清蛋白浓度测定的问题 已有2人参与

我高分子材料专业的，在做一些抗蛋白吸附的材料，在具有微孔的聚偏氟乙烯膜表面镀上亲水的coating，可以起到抗蛋白吸附的作用。在性能测试的过程中，我配制了1mg/ml 的牛血清蛋白溶液（BSA溶液），并绘制了BSA的标准曲线，用的是紫外分光光度法测的蛋白浓度，波长设置的是280nm。然后我将我测材料放在1mg/ml 的BSA溶液中浸泡并轻微振荡，保持24h，温度为室温 30℃，然后测溶液中蛋白的浓度，但结果发现测得的浓度均大于初始浓度，不是偶然，已经做了很多组实验，目前我排除了多个可能导致吸光度增大的因素，如coating在浸泡过程中有溶出物增加吸光度，和基底材料中溶出物，以及亲水镀层吸水使溶液浓缩，但是这些经实验和论证后均不成立，是不是问题出在蛋白本身上，我查资料BSA保存需冷藏，不知道30℃放置24h会不会导致蛋白变性，变性会导致吸光度增加吗

有对这方面了解的请帮我指点一下，这个问题已经困扰了我很久，接下来的实验不知道该怎么办了
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1楼 2015-08-06 14:41:32
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

syhzlsd

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
米可儿come: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-08-18 10:40:50
30度，24h,这个温度太高，BSA应该不会变性，但是应该会降解，降解的话，蛋白吸光值会变大。另外用G-250法测浓度应该比测280精确很多！
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12楼2015-08-18 10:05:56
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普通回帖

米可儿come

木虫 (正式写手)
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2楼2015-08-08 22:19:23
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米可儿come

木虫 (正式写手)
顶
3楼2015-08-08 22:19:45
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米可儿come

木虫 (正式写手)
拜托帮帮忙
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4楼2015-08-08 22:20:13
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米可儿come

木虫 (正式写手)
5楼2015-08-08 22:20:42
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)
★
米可儿come: 金币+1 2015-08-11 10:23:14
本帖内容被屏蔽
6楼2015-08-09 23:37:00
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)
★
米可儿come: 金币+1, ★有帮助 2015-08-18 10:41:42
本帖内容被屏蔽
7楼2015-08-09 23:37:36
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米可儿come

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ghqiu09 at 2015-08-09 23:37:00
一般我们测蛋白浓度都是用考染方法测的，还有，如果你要测280的光吸收，你必须用石英比色皿，否则OD值肯定大，因为普通的玻璃比色皿在紫外波段是有光吸收的。考染是测OD595，玻璃就行

我用的是石英比色皿，我看过类似做这个材料蛋白的吸附的都是用的这种方法，选择280nm紫外测试。
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8楼2015-08-11 10:24:31
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米可儿come

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ghqiu09 at 2015-08-09 23:37:36
你自己百度蛋白浓度测定方法，考染，BCA等等，很多选择

我用这个方法主要是觉得比较简单方便，我不是专业生物方向，这个数据也不作为主要数据，所以只要有大致的趋势就可以，不需要特别精准的要求，如果以这个为前提，这个方法可不可行，如果不可行，我的问题应该出在哪里呢，如果我配制溶液的水不是超纯水会不会对蛋白质的性质影响很大
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9楼2015-08-11 10:26:58
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)
★
米可儿come: 金币+1 2015-08-18 10:42:06
本帖内容被屏蔽
10楼2015-08-11 11:42:20
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