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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物总在引物上有突变，问题出在哪？
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monsteryu

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物总在引物上有突变，问题出在哪？ 已有3人参与

求助，上游引物上加了pET28a的RBS及与ATG之间的间隔区，P出来的DNA片段构建到载体上，怎么做都在引物上有几个突变，而且每次突变都不一样，重做过4次了，引物、酶都换过了，还是有问题，不知道问题出在哪？求指点！
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1楼 2015-08-05 20:49:30
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haloarchaeon

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能还是你的引物有问题，用更纯的引物。
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haloarchaeon
2楼2015-08-06 09:23:08
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A0078990

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换家公司给你合成引物。。。。
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3楼2015-08-06 09:31:32
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monsteryu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by haloarchaeon at 2015-08-06 09:23:08
可能还是你的引物有问题，用更纯的引物。

引物我鉴定过没有问题，而且PCR产物我也拿去测过序，没有突变，应该就是构建到载体上之后发生的突变
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4楼2015-08-06 15:30:43
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haloarchaeon

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by monsteryu at 2015-08-06 15:30:43
引物我鉴定过没有问题，而且PCR产物我也拿去测过序，没有突变，应该就是构建到载体上之后发生的突变...

那只能先换个载体试试
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haloarchaeon
5楼2015-08-07 10:01:50
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yaohuaibing

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的片段是多大的？
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每天都在读书和读人。书易懂，人难解。
6楼2015-08-07 10:16:24
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monsteryu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yaohuaibing at 2015-08-07 10:16:24
你的片段是多大的？

片段大小是1.5kb
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7楼2015-08-07 11:05:20
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