24小时热门版块排行榜    

查看: 1793  |  回复: 6

monsteryu

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物总在引物上有突变,问题出在哪? 已有3人参与

求助,上游引物上加了pET28a的RBS及与ATG之间的间隔区,P出来的DNA片段构建到载体上,怎么做都在引物上有几个突变,而且每次突变都不一样,重做过4次了,引物、酶都换过了,还是有问题,不知道问题出在哪?求指点!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haloarchaeon

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能还是你的引物有问题,用更纯的引物。
haloarchaeon
2楼2015-08-06 09:23:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

A0078990

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换家公司给你合成引物。。。。
3楼2015-08-06 09:31:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

monsteryu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by haloarchaeon at 2015-08-06 09:23:08
可能还是你的引物有问题,用更纯的引物。

引物我鉴定过没有问题,而且PCR产物我也拿去测过序,没有突变,应该就是构建到载体上之后发生的突变
4楼2015-08-06 15:30:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haloarchaeon

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by monsteryu at 2015-08-06 15:30:43
引物我鉴定过没有问题,而且PCR产物我也拿去测过序,没有突变,应该就是构建到载体上之后发生的突变...

那只能先换个载体试试
haloarchaeon
5楼2015-08-07 10:01:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yaohuaibing

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的片段是多大的?
每天都在读书和读人。书易懂,人难解。
6楼2015-08-07 10:16:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

monsteryu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yaohuaibing at 2015-08-07 10:16:24
你的片段是多大的?

片段大小是1.5kb
7楼2015-08-07 11:05:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 monsteryu 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +4 瞬息宇宙 2026-08-10 4/200 2026-08-11 02:02 by 旁观2020
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +3 Tide man 2026-08-10 3/150 2026-08-10 21:48 by GZUZM
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
请填处理意见