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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 真菌敲除，PCR验证问题。
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ackee

新虫 (小有名气)

[交流] 真菌敲除，PCR验证问题。 已有2人参与

用同源重组的方法敲除一个真菌的基因，PCR验证发现敲除成功，用抗性基因的引物与同源臂上的引物可以P出来，其代谢产物也有变化。
但是我把这个菌株再次培养后，PCR验证就失败了，试了很多次都P不出来，但是代谢产物的变化还是和以前一样。
请问这是为什么？
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敲除验证

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1楼 2015-08-03 23:36:35
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丶简简单单

无虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你可能就没有敲掉基因。建议重新做敲除。我做过原核的敲除，一开始验证是对的，接下来做抗性消除的时候，大半个月发现做不来，回过头又验证了下，发现没有完全敲除，然后重新做了，接下来挺顺利的。
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3楼2016-05-21 16:00:45
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痞子无敌

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问楼主现在问题解决了吗
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当你当你的眼睛眯着笑
2楼2016-05-21 11:48:29
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ackee

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 痞子无敌 at 2016-05-21 11:48:29
请问楼主现在问题解决了吗

换了个酶，就P出来了，可能提取DNA的时候有杂质

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4楼2016-05-22 17:41:01
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ackee

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 丶简简单单 at 2016-05-21 16:00:45
你可能就没有敲掉基因。建议重新做敲除。我做过原核的敲除，一开始验证是对的，接下来做抗性消除的时候，大半个月发现做不来，回过头又验证了下，发现没有完全敲除，然后重新做了，接下来挺顺利的。

换个酶就P出来了

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5楼2016-05-22 17:42:01
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