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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩增基因问题，求助于大家
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295109862wd

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增基因问题，求助于大家 已有1人参与

我要做基因克隆，可现在卡在PCR这里了…第一个基因我用primer5设计的引物，P出来应该是373bp，可总是出来很多别的条带，blast引物，是特异性的。第二个基因应该是354bp，可出来的条带总在1800bp处，一条带，很清晰，blast时确实不是特异性的（手机客户端没办法上图，电脑也不会）。此处有个问题blast时要输入物种，一般是人类，我设置物种和不设，结果一样嘛…我做的物种没人做，所以网上没有数据，我是否要设置同科别的植物？新手，求各位大侠帮忙…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-08-01 07:37:48
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yufeiwaner

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
295109862wd: 金币+2, ★有帮助 2015-08-01 19:43:22
测序花不了几个钱，回收一下，送测序吧。万一就是呢？
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3楼2015-08-01 14:26:19
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295109862wd

新虫 (初入文坛)
有一点忘记说了，有个老师说可能是基因组污染，我提RNA时加DNase处理了…况且没加酶处理的RNA电泳图也没有基因组DNA条带啊，还有我用叶片提的RNA是5条带甚至6条带，用茎提的是3条带…分别用这些RNA反转录，以这些不同的模板做PCR，结果第一个基因条带还是挺多，第二个基因没有条带出现了…

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2015-08-01 07:44:09
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295109862wd

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yufeiwaner at 2015-08-01 14:26:19
测序花不了几个钱，回收一下，送测序吧。万一就是呢？

好的…谢啦

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-08-01 19:42:44
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