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295109862wd

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增基因问题,求助于大家 已有1人参与

我要做基因克隆,可现在卡在PCR这里了…第一个基因我用primer5设计的引物,P出来应该是373bp,可总是出来很多别的条带,blast引物,是特异性的。第二个基因应该是354bp,可出来的条带总在1800bp处,一条带,很清晰,blast时确实不是特异性的(手机客户端没办法上图,电脑也不会)。此处有个问题blast时要输入物种,一般是人类,我设置物种和不设,结果一样嘛…我做的物种没人做,所以网上没有数据,我是否要设置同科别的植物?新手,求各位大侠帮忙…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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yufeiwaner

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
295109862wd: 金币+2, 有帮助 2015-08-01 19:43:22
测序花不了几个钱,回收一下,送测序吧。万一就是呢?
3楼2015-08-01 14:26:19
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295109862wd

新虫 (初入文坛)

有一点忘记说了,有个老师说可能是基因组污染,我提RNA时加DNase处理了…况且没加酶处理的RNA电泳图也没有基因组DNA条带啊,还有我用叶片提的RNA是5条带甚至6条带,用茎提的是3条带…分别用这些RNA反转录,以这些不同的模板做PCR,结果第一个基因条带还是挺多,第二个基因没有条带出现了…

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-08-01 07:44:09
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295109862wd

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yufeiwaner at 2015-08-01 14:26:19
测序花不了几个钱,回收一下,送测序吧。万一就是呢?

好的…谢啦

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-08-01 19:42:44
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