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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » miRNA RT-PCR溶解曲线以及扩增效率
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水岸云边

新虫 (初入文坛)

[求助] miRNA RT-PCR溶解曲线以及扩增效率 已有1人参与

新手求助：刚做pcr，我用的是SYBR法，样本是提取》18bp的总RNA然后，加尾法反转录，PCR扩增CT值都在25-30之间，跑溶解曲线，结果目的产物溶解曲线的TM值都在65-70之间，TM值明显偏小，U6内参是试剂盒自带的，扩增出来也是一样，TM值70，扩增出来的应该不是目的产物，可能的原因是哪些

miRNA RT-PCR溶解曲线以及扩增效率
P50729-145710.jpg
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1楼 2015-07-30 22:41:13
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lihu0112

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1、PCR产物跑电泳和设计的目的片段比大小
2、TM值小于80一般认为是引物二聚体
3、咨询卖试剂盒的公司，技术支持，看他们的质控报告TM值。
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2楼2015-09-07 09:08:27
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