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jinshengfang木虫 (正式写手)
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噬菌斑 已有1人参与
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请大家帮我看看我这个噬菌斑平板，噬菌斑中间长了菌落，是说明这个菌是溶源菌吗？ 这样能说明我这个菌感染了温和噬菌体吗 我这个菌是BL21（DE3），我看文献中提及这个菌是DE3溶源菌，还是这个菌图平板就会这样子了  IMG_20150730_075824.jpg |
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csyhaoge
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
jinshengfang: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢 2015-07-31 14:20:27
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jinshengfang: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢 2015-07-31 14:20:27
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不能说明！ 首先，你平板上标注的日期是7月5日，距你拍照已经过去了25天，这个时间对于培养大肠杆菌、噬菌体来说显得太长了点。在不知道你培养条件的情况下，根据我实验室长期做噬菌体相关实验的经验看，平板放置时间过长，其噬菌斑中央位置都会长出细菌，这些细菌只是暂时性的获得了对噬菌体的抵抗能力，当把它挑出来作进一步的实验，你会发现，该菌依旧对该噬菌体敏感，这一现象，我们简称为暂时性的噬菌体抵制现象。 第二，仅从你这一块平板上看，我不大明白的是，为什么会有至少三种大小不同的噬菌斑。按理来说，一种菌感染一种噬菌体的时候，其形成的噬菌斑大小应该相对均匀。难道你用的是复杂样品？还是噬菌体稀释度没控制好且倒双层的时候没有铺均匀？ |
2楼2015-07-31 10:24:54
jinshengfang
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3楼2015-07-31 12:04:45
csyhaoge
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【答案】应助回帖
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laozuzunzhe: 金币+3, MicEPI+1, 鼓励热心应助！ 2015-08-04 14:34:03
laozuzunzhe: 金币+3, MicEPI+1, 鼓励热心应助！ 2015-08-04 14:34:03
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嗯~ 大肠杆菌BL21（DE3）的基因型为F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5])，该菌株是以T7 RNA聚合酶为表达系统的外源基因蛋白高效表达的宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的插入到λ噬菌体DE3区，其表达受该区域lacUV5启动子调控，该区整合在BL21染色体上，BL21（DE3）适合表达非毒性蛋白。 想来你们应该是用该菌株进行大规模的发酵生产。通过你说的，个人判断应该是：1、发酵液受到了噬菌体的污染（你的点板实验可以验证培养液中是否含有该菌株的噬菌体）2、该噬菌体污染应该是来自外界的烈性噬菌体（也许是来自空气中噬菌体的污染，也可能是培养基灭菌不彻底使之含有噬菌体），BL21(DE3）基因组中虽然含有λ噬菌体基因，但其基本不会裂解形成噬菌斑的。3、涂布平板上形成的噬菌斑中央出现了菌落，不能说明形成该菌落的菌是溶原性的，原因第一条回复我已经说了。 希望能对你有所帮助~ 祝实验顺利~ |
4楼2015-08-01 10:18:44
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