24小时热门版块排行榜    

查看: 1915  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

tinychan

新虫 (初入文坛)

[交流] 染色体步移法扩增侧翼序列 已有4人参与

最近在做染色体步移法扩增侧翼序列,做了好多次,三轮PCR条带都是弥散的,用了TAKARA的试剂盒,也没有结果,技术说我的引物特异性不好,但是我设计的时候已经是没有错配的。请问引物设计有什么注意事项呀?是要在保守区设计吗?求大神支招!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WANWAN515626

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by tinychan at 2015-08-05 16:03:42
这是我最近两次做得,设计引物的时候按照严格的没有错配,没有二级结构。操作按照说明书做,但还是没有结果,而且在第三轮PCR的时候突然出现一条较大而且很亮的条带求大神赐教!

PS.1-3为AP1的第一、第二、第三轮 ...

用FPNI-PCR法扩增第一轮没有结果是正常的,一般只有第三轮才会有结果,看你这结果还挺好的,条带的位置是你想要的话,你就做成功了啊
8楼2016-03-11 17:58:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

Neo2000

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看来你还是没有很好的理解walking技术啊

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-07-29 19:32:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (知名作家)


商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容

小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不是昆虫就是鱼虾,冷门?

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-07-29 19:53:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tinychan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-07-29 19:32:52
看来你还是没有很好的理解walking技术啊

我用的是FPNI-PCR,采用的是一条随机引物和一条特异性引物进行热不对称反应进行侧翼序列扩增的,设计了巢式引物,但是三轮下来总是会有弥散,怎么办呢?
4楼2015-07-29 22:44:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +8 archvillain 2026-08-15 15/750 2026-08-15 16:23 by 医学老男孩
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 14:58 by QXtWNz7PI7wZ
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +7 majunge000 2026-08-11 9/450 2026-08-15 13:34 by kiz2011
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 HFw0lei2R37i 2026-08-14 9/450 2026-08-15 11:33 by KxMI1BYBxWX1
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 7lpolszZVXgi 2026-08-14 6/300 2026-08-15 09:28 by sunzitan
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:41 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见