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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 染色体步移法扩增侧翼序列
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tinychan

新虫 (初入文坛)

[交流] 染色体步移法扩增侧翼序列 已有4人参与

最近在做染色体步移法扩增侧翼序列，做了好多次，三轮PCR条带都是弥散的，用了TAKARA的试剂盒，也没有结果，技术说我的引物特异性不好，但是我设计的时候已经是没有错配的。请问引物设计有什么注意事项呀？是要在保守区设计吗？求大神支招！
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1楼 2015-07-29 18:22:52
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tinychan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-07-29 19:32:52
看来你还是没有很好的理解walking技术啊

我用的是FPNI-PCR，采用的是一条随机引物和一条特异性引物进行热不对称反应进行侧翼序列扩增的，设计了巢式引物，但是三轮下来总是会有弥散，怎么办呢?
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4楼2015-07-29 22:44:02
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Neo2000

木虫 (著名写手)
★
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看来你还是没有很好的理解walking技术啊

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2楼2015-07-29 19:32:52
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biosci

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★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不是昆虫就是鱼虾，冷门？

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3楼2015-07-29 19:53:43
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Neo2000

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by tinychan at 2015-07-29 22:44:02
我用的是FPNI-PCR，采用的是一条随机引物和一条特异性引物进行热不对称反应进行侧翼序列扩增的，设计了巢式引物，但是三轮下来总是会有弥散，怎么办呢?...

方法不得当，没结果就很正常了，你试试按试剂盒说明书做下

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5楼2015-07-30 07:58:54
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