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ktom000

新虫 (初入文坛)

[交流] 大肠杆菌与酵母体系中,怎么进行表达外源蛋白的膜定位? 已有3人参与

我需要做的事情就是将外源蛋白表达在细胞外膜上,不知道如何定位?我现在研三,刚开题,除看文献外没有任何基础,时间紧迫...
以下思路:
1.LamB蛋白153位点插入外源蛋白,但是我不知道难度如何,操作工具是否难获得,能不能成功;
2.信号肽-外源蛋白-lgA等膜上蛋白系统,如OmcP、a凝集素等,这套系统信号肽,膜锚定蛋白选择什么容易成功,具体序列,我也不知道;
3.是否存在质粒有这种特殊功能的,我只知道有分泌蛋白表达系统,如果有好获得么,时间紧迫;
4.其他一些思路或建议,比如外源蛋白的特殊要求,整个实验中需要注意的地方等等,求指导...

另外询问一下,自己设计的基因序列,在大肠杆菌、酵母中表达的情况,能否表达(不要求活性的情况下),会不会被水解掉
还是有什么高招,可以指导我怎么将自己设计的基因序列在细菌、真菌的细胞外膜上表达。
不胜感激,联系方式:290602987@qq.com,重点是思路虽然清楚,但可行性不了解,并且实验工具获得难度不清楚,操作难度不清楚...
时间紧迫!别问我前两年干什么了,上过研的都应该知道,我只能说我不是玩过来的,其他话不好说...
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晴晴紫儿风

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by evil丶zero at 2015-08-01 16:01:29
不过我帮不了你。你要做的是吧蛋白表达在膜上?我现在做的只是分泌到胞外,就是单纯用信号肽+目的蛋白。我很好奇,干嘛一定要锚定在膜上呢?

他想做的应该是大肠、酵母的表面展示系统
8楼2017-11-06 10:30:37
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ktom000

新虫 (初入文坛)

我现在就是不知道可行性有多大,我能不能做完...因为不涉及,所以心里没有底...
2楼2015-07-29 17:32:01
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ktom000

新虫 (初入文坛)

是我说的不清楚么,还是发送有问题,来个人呗
4楼2015-07-30 16:40:04
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evil丶zero

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不过我帮不了你。你要做的是吧蛋白表达在膜上?我现在做的只是分泌到胞外,就是单纯用信号肽+目的蛋白。我很好奇,干嘛一定要锚定在膜上呢?
6楼2015-08-01 16:01:29
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