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竹林樱草

新虫 (小有名气)

[交流] 怎样验证蛋白与小分子化合物是否结合? 已有10人参与

大家好:有没有人知道验证小分子化合物是否与蛋白质结合的实验方法?想做结晶,但周期太长,又不好做,有没有简单的方法?急求!谢谢!
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yushhsioc

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 竹林樱草 at 2015-07-29 14:33:39
之前没接触过pulldown实验,查过后认为是验证两个蛋白或多个蛋白的结合实验,但是我需要验证的是小分子化合物与蛋白结合,pulldown实验不行吧?...

pulldown是用来看小分子和蛋白结合的,和另外一个蛋白没关系。当然,要看小分子适不适合接个biotin,还保留了结合活性,还挺麻烦的,除非学术界搞搞。看你的情况,小分子和蛋白都已经准备好了,那就试条件长晶体呗。最多用ITC或其它验证一下就好了。
6楼2015-07-30 10:37:27
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iupo54

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你是不是目标靶点蛋白
2楼2015-07-29 08:56:47
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yushhsioc

铁虫 (正式写手)


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蛋白水平几个assay先测一下,或者是再加上细胞水平,用pulldown实验,在小分子上面适当部位接上biotin,不影响活性的基础上,看看能不能把靶向蛋白拉到。
或者有条件的可以用核磁共振来鉴定。
3楼2015-07-29 09:01:11
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竹林樱草

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by iupo54 at 2015-07-29 08:56:47
你是不是目标靶点蛋白

是靶蛋白,在做结晶解结构前想先验证药物是否结合上去了
4楼2015-07-29 12:10:09
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竹林樱草

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yushhsioc at 2015-07-29 09:01:11
蛋白水平几个assay先测一下,或者是再加上细胞水平,用pulldown实验,在小分子上面适当部位接上biotin,不影响活性的基础上,看看能不能把靶向蛋白拉到。
或者有条件的可以用核磁共振来鉴定。

之前没接触过pulldown实验,查过后认为是验证两个蛋白或多个蛋白的结合实验,但是我需要验证的是小分子化合物与蛋白结合,pulldown实验不行吧?
5楼2015-07-29 14:33:39
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syhu_007012

木虫 (正式写手)


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放射性配体结合实验, 前提是有放射性标记的配体分子
7楼2015-07-31 16:03:51
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竹林樱草

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by syhu_007012 at 2015-07-31 16:03:51
放射性配体结合实验, 前提是有放射性标记的配体分子

如果标记配体分子的话,是用打质谱的方法检测吗?初次接触,请谅解!
8楼2015-08-03 21:19:29
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pipwang

金虫 (正式写手)

用核磁吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
9楼2015-08-03 22:13:07
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wobaby

铁虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你能弄出未知的  靶点+小分子晶体可以发 Nature了
http://emuch.net/bbs/viewthread.php?tid=5374021&pid=9#pid9
10楼2015-08-04 00:33:42
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