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竹林樱草

新虫 (小有名气)

[交流] 怎样验证蛋白与小分子化合物是否结合？ 已有10人参与

大家好：有没有人知道验证小分子化合物是否与蛋白质结合的实验方法？想做结晶，但周期太长，又不好做，有没有简单的方法？急求！谢谢！
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1楼 2015-07-28 20:47:17
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yushhsioc

铁虫 (正式写手)
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5楼: Originally posted by 竹林樱草 at 2015-07-29 14:33:39
之前没接触过pulldown实验，查过后认为是验证两个蛋白或多个蛋白的结合实验，但是我需要验证的是小分子化合物与蛋白结合，pulldown实验不行吧？...

pulldown是用来看小分子和蛋白结合的，和另外一个蛋白没关系。当然，要看小分子适不适合接个biotin，还保留了结合活性，还挺麻烦的，除非学术界搞搞。看你的情况，小分子和蛋白都已经准备好了，那就试条件长晶体呗。最多用ITC或其它验证一下就好了。
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6楼2015-07-30 10:37:27
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iupo54

新虫 (小有名气)
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你是不是目标靶点蛋白
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2楼2015-07-29 08:56:47
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yushhsioc

铁虫 (正式写手)
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蛋白水平几个assay先测一下，或者是再加上细胞水平，用pulldown实验，在小分子上面适当部位接上biotin，不影响活性的基础上，看看能不能把靶向蛋白拉到。
或者有条件的可以用核磁共振来鉴定。
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3楼2015-07-29 09:01:11
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竹林樱草

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by iupo54 at 2015-07-29 08:56:47
你是不是目标靶点蛋白

是靶蛋白，在做结晶解结构前想先验证药物是否结合上去了
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4楼2015-07-29 12:10:09
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竹林樱草

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yushhsioc at 2015-07-29 09:01:11
蛋白水平几个assay先测一下，或者是再加上细胞水平，用pulldown实验，在小分子上面适当部位接上biotin，不影响活性的基础上，看看能不能把靶向蛋白拉到。
或者有条件的可以用核磁共振来鉴定。

之前没接触过pulldown实验，查过后认为是验证两个蛋白或多个蛋白的结合实验，但是我需要验证的是小分子化合物与蛋白结合，pulldown实验不行吧？
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5楼2015-07-29 14:33:39
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syhu_007012

木虫 (正式写手)
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放射性配体结合实验， 前提是有放射性标记的配体分子
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7楼2015-07-31 16:03:51
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竹林樱草

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by syhu_007012 at 2015-07-31 16:03:51
放射性配体结合实验， 前提是有放射性标记的配体分子

如果标记配体分子的话，是用打质谱的方法检测吗？初次接触，请谅解！
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8楼2015-08-03 21:19:29
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pipwang

金虫 (正式写手)
用核磁吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2015-08-03 22:13:07
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wobaby

铁虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你能弄出未知的  靶点+小分子晶体可以发 Nature了
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http://emuch.net/bbs/viewthread.php?tid=5374021&pid=9#pid9
10楼2015-08-04 00:33:42
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