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TaqMan genotyping 引物探针设计
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大家好， 最近在设计分型用的TaqMan引物探针， 1）我看到原理上是扩增区间越小越好，比如75-100，但是如果PCR的引物没办法得到特异性扩增，需要把amplicon调到200-250之间怎么办？也有人说这时候只要probe特异即可，只是降低了模版数量？真OR假？ 2）引物的tm一般都在60°附近，但是理论上需要probe的tm65-70，但是这个条件其实非常苛刻啊，即使调节到>=62°，有时候也是无法设计出来啊，我查看文献的时候经常看到52-58°之间的探针，这能成吗？理论上有时候实验条件都不太会降低到这么低啊？ 麻烦大神们帮我解答下啊？ 还有国内除了life有没有便宜的定制taqman探针的地方？ 谢谢腊~~ |
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