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0.2M Phosphate Buffer的磷酸盐缓冲盐应该如何配制已有1人参与
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最近碰上的，FDA给出的溶出介质： Acid Stage: 0.01 N HCl:Buffer Stage: 50 mM phosphate buffer, pH 6.8 with 0.37 % Polysorbate 80 (after120 minutes, to the acid stage, add 250 mL of 0.2M Phosphate Buffer, 1.46%Polysorbate 80) 。 我理解为：耐酸阶段750ml 0.01N盐酸作为溶出介质，缓冲阶段：后向750ml 0.01N盐酸中加入250ml 0.2M Phosphate Buffer，并且这250ml 0.2M Phosphate Buffer中有1.46%的吐温80.【到这里我感觉应该是没理解错的吧？】 那么接下来问题来了，这个0.2M Phosphate Buffer的磷酸盐缓冲盐应该如何配制，才能保证加入250ml后变成1000ml的介质pH为6.8呢？ 请有经验的战友指点迷津。 另外就是，我采用《中国药典》的750ml 0.1N盐酸+250ml 0.2M 磷酸三钠进行配制，pH的确是可以达到pH6.8左右。今天犯浑，没考虑到FDA给出的是750ml 0.01N盐酸，而直接加了250ml 0.2M磷酸三钠。 做完溶出后发现自研与原研也是相似的，然后想着再复核下pH吧，结果发现pH居然差不多11.89，心都碎了。犯浑啊犯浑。 求指点这个0.2M Phosphate Buffer的磷酸盐缓冲盐应该如何配制，才能保证加入250ml后，1000ml的介质pH为6.8呢？ |
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millan23
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2楼2015-07-27 15:26:29
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Sodium phosphate buffer (0.2 M) MATERIALS Reagents Na2HPO4•2H2O NaH2PO4•H2O METHOD 1. Dissolve 35.61 g of Na2HPO4•2H2O and 27.6 g of NaH2PO4•H2O separately in H2O. 2. Adjust the volume of each solution to 1000 mL. Store the stock solutions for up to 6 mo at 4°C. 3. To prepare the buffer, mix the stock solutions as follows: o i. For 50 mL: 38.5 mL of Na2HPO4•2H2O and 11.5 mL of NaH2PO4•H2O. o ii. For 100 mL: 77 mL of Na2HPO4•2H2O and 23 mL of NaH2PO4•H2O. o iii. For 500 mL: 385 mL of Na2HPO4•2H2O and 115 mL of NaH2PO4•H2O. o iv. For 1000 mL: 770 mL of Na2HPO4•2H2O and 230 mL of NaH2PO4•H2O. 4. Check the pH of the solution at room temperature. If necessary, adjust the pH to 7.3 刚参照这样的配法重新配制了，验证过是ok的，就像你说的一样，在缓冲液的配制过程中是真的很容易带进去误差。学习了！ |
3楼2015-07-27 16:35:49