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lvlingzhu

铜虫 (小有名气)

[求助] 着急呀,高效液相问题,请高人指点一二呀 已有6人参与

本人最近在用高效液相色谱测黄酮,色谱条件是:A甲醇 B 0.1%甲酸水溶液    流速:0.3ml/min   进样量:5微升     柱温:30℃     梯度条件为:0-20min:80-40%B   20-30min: 40-80B。无奈出现的峰不理想,也试过其他一些梯度,但是前边的峰都分不开,拜托大家指点指点。

着急呀,高效液相问题,请高人指点一二呀
IMG_20150726_211731.jpg
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缤纷海洋

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
sytucom: 金币+2, 回帖很精彩,希望继续关注 2015-07-30 11:01:44
lvlingzhu: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-07-30 22:16:38
我曾经也做过黄酮的液相,个人建议,你把0~5min保持95%B,这样做能够使极性大的杂质很快出峰,不影响后面黄酮的测定,还有就是提高甲酸的浓度,酸度越高越利于黄酮类物质在反相柱里面保留,保留时间越长,则越容易分开,我以前用的是冰醋酸,不行你也可以用冰醋酸试试。还有就是哪段时间峰比较集中,你就把哪段时间的梯度变化快一些,我的经验是梯度变化越快越容易使分不开的成分分开,还有就是你的流速是不是太慢了一点?另外,如果以上这些还不能解决你的问题,建议你重新购买一根新柱子试试,不要用国产的保护柱,柱子买安捷伦或者其他好牌子的。希望对你有所帮助,祝好!
6楼2015-07-30 10:38:09
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lvlingzhu: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-07-27 10:04:34
lvlingzhu: 金币+2 2015-07-27 21:00:45
sytucom: 金币+2, 回帖很精彩 2015-07-30 13:12:12
把7.5-13min这段时间内流动相梯度变化的速率调再慢点
2楼2015-07-26 22:42:19
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sytucom

版主 (知名作家)

日光之下,并无新事

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lvlingzhu: 金币+2 2015-07-27 21:01:01
0-20min:80-40%B改为 0-40min:80-40%B
已有的事,后必再有,已行的事,后必再行。
3楼2015-07-26 22:53:20
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zs050604

木虫 (正式写手)

张氏油脂

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lvlingzhu: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-07-30 09:35:16
sytucom: 金币+2, 回帖很精彩 2015-07-30 13:12:54
改为0-30min  80%-40%B,如果还不行,就改为0-50min  80%-60%B  这肯定就行了
科学无止境,奋斗无终点
4楼2015-07-30 08:15:24
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