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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 实验室分析、仪器 » 着急呀，高效液相问题，请高人指点一二呀
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lvlingzhu

铜虫 (小有名气)

[求助] 着急呀，高效液相问题，请高人指点一二呀 已有6人参与

本人最近在用高效液相色谱测黄酮，色谱条件是：A甲醇 B 0.1%甲酸水溶液    流速：0.3ml/min   进样量：5微升     柱温：30℃     梯度条件为：0-20min：80-40%B   20-30min: 40-80B。无奈出现的峰不理想，也试过其他一些梯度，但是前边的峰都分不开，拜托大家指点指点。

着急呀，高效液相问题，请高人指点一二呀
IMG_20150726_211731.jpg
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1楼 2015-07-26 21:49:11
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lvlingzhu: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-07-27 10:04:34
lvlingzhu: 金币+2 2015-07-27 21:00:45
sytucom: 金币+2, 回帖很精彩 2015-07-30 13:12:12
把7.5-13min这段时间内流动相梯度变化的速率调再慢点
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2楼2015-07-26 22:42:19
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sytucom

版主 (知名作家)

日光之下，并无新事

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lvlingzhu: 金币+2 2015-07-27 21:01:01
0-20min：80-40%B改为 0-40min：80-40%B
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已有的事，后必再有，已行的事，后必再行。
3楼2015-07-26 22:53:20
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zs050604

木虫 (正式写手)

张氏油脂

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lvlingzhu: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-07-30 09:35:16
sytucom: 金币+2, 回帖很精彩 2015-07-30 13:12:54
改为0-30min  80%-40%B，如果还不行，就改为0-50min  80%-60%B  这肯定就行了
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科学无止境，奋斗无终点
4楼2015-07-30 08:15:24
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lvlingzhu

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zs050604 at 2015-07-30 08:15:24
改为0-30min  80%-40%B，如果还不行，就改为0-50min  80%-60%B  这肯定就行了

0-50min  80%-60%B， 也就是0-30min，80%-68%，对吗？我也刚接触液相，不太懂
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5楼2015-07-30 09:35:07
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缤纷海洋

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
sytucom: 金币+2, 回帖很精彩，希望继续关注 2015-07-30 11:01:44
lvlingzhu: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-07-30 22:16:38
我曾经也做过黄酮的液相，个人建议，你把0~5min保持95%B，这样做能够使极性大的杂质很快出峰，不影响后面黄酮的测定，还有就是提高甲酸的浓度，酸度越高越利于黄酮类物质在反相柱里面保留，保留时间越长，则越容易分开，我以前用的是冰醋酸，不行你也可以用冰醋酸试试。还有就是哪段时间峰比较集中，你就把哪段时间的梯度变化快一些，我的经验是梯度变化越快越容易使分不开的成分分开，还有就是你的流速是不是太慢了一点？另外，如果以上这些还不能解决你的问题，建议你重新购买一根新柱子试试，不要用国产的保护柱，柱子买安捷伦或者其他好牌子的。希望对你有所帮助，祝好！
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6楼2015-07-30 10:38:09
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雪卡yu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lvlingzhu: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-07-30 22:16:46
峰哪里分不开就把有机溶剂的浓度增加的缓慢一点，你现在0-20min的有机溶剂是20-60%，建议20-50%或者更小试试（即你这里的80-50%B）
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7楼2015-07-30 11:05:39
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lvlingzhu

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 缤纷海洋 at 2015-07-30 10:38:09
我曾经也做过黄酮的液相，个人建议，你把0~5min保持95%B，这样做能够使极性大的杂质很快出峰，不影响后面黄酮的测定，还有就是提高甲酸的浓度，酸度越高越利于黄酮类物质在反相柱里面保留，保留时间越长，则越容易分 ...

好的，我先试试，谢谢您的热心帮助，另外，我还想请教一下，什么情况下液相实验就算成功了呀
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8楼2015-07-30 11:45:50
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zs050604

木虫 (正式写手)

张氏油脂

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by lvlingzhu at 2015-07-30 09:35:07
0-50min  80%-60%B， 也就是0-30min，80%-68%，对吗？我也刚接触液相，不太懂...

差不多可以这样认为
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科学无止境，奋斗无终点
9楼2015-07-31 08:54:04
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zs050604

木虫 (正式写手)

张氏油脂
引用回帖:
5楼: Originally posted by lvlingzhu at 2015-07-30 09:35:07
0-50min  80%-60%B， 也就是0-30min，80%-68%，对吗？我也刚接触液相，不太懂...

可以的
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科学无止境，奋斗无终点
10楼2015-07-31 08:55:09
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