应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » T载连不上！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
31/1返回列表
查看: 1823  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

孙天阳0304

新虫 (初入文坛)

[求助] T载连不上！

我的目的片段1630bp，开始扩增目的片段时，第一次用PrimeStar没结果，第二次用KOD有结果，加A尾后成功连T3，测序后结果完全不对，且只测出一端酶切位点，第三次用Hifi有结果，但一直未连上T载，操作步骤完全按照说明书，PCR产物和T3各1μL，水3μL，冰浴30min，42度热激30s，冰上2min，加250μLYEB，37度200转1h，后涂含羧苄的平板，过夜后平板不长菌，已经连了3次了，都是不长菌。PCR产物是胶回收后才连T载的，也尝试过更换感受态（确定未过期）和T3，但都是不长菌。我不理解的是，T3本身也有氨苄抗性，就算是没有连上目的片段是不是也会长的呀？另外如果再连不上的话该怎么办，可否尝试直接连表达载体。请各位指教！万分感谢！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-07-23 22:38:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cclh

新虫 (初入文坛)
我的也是，你的问题解决了吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-05-03 13:48:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨小灯123

新虫 (初入文坛)
我做的t1也是这杨，头疼。
赞一下 回复此楼
3楼2018-04-18 14:30:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 孙天阳0304 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +6 崔wj 2026-03-26 6/300 2026-03-29 01:11 by hanserlol
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +8 谷雨上岸 2026-03-23 9/450 2026-03-29 01:00 by 我是小康
[考研] 315求调剂 +4 akie... 2026-03-28 5/250 2026-03-28 21:05 by zhq0425
[考研] 275求调剂 +10 Micky11223 2026-03-25 14/700 2026-03-28 15:48 by Micky11223
[考研] 0703化学 +10 妮妮ninicgb 2026-03-27 10/500 2026-03-28 14:07 by 哒哒哒呱呱呱
[考研] 0856求调剂 +11 zhn03 2026-03-25 12/600 2026-03-28 13:32 by 唐沐儿
[考研] 317求调剂 +6 十闲wx 2026-03-24 6/300 2026-03-28 13:27 by Iveryant
[考研] 085701环境工程，267求调剂 +16 minht 2026-03-26 16/800 2026-03-28 12:16 by zllcz
[考研] 张芳铭-中国农业大学-环境工程专硕-298 +4 手机用户 2026-03-26 4/200 2026-03-28 07:17 by mmm just
[考研] 07化学280分求调剂 +10 722865 2026-03-23 10/500 2026-03-27 15:51 by Plutoqq
[考研] 08开头275求调剂 +4 拉谁不重要 2026-03-26 4/200 2026-03-27 14:12 by Delta2012
[考研] 298调剂 +3 jiyingjie123 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:57 by wxiongid
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +5 SYA！ 2026-03-23 5/250 2026-03-27 09:29 by 不吃魚的貓
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-26 4/200 2026-03-27 08:04 by chemisry
[考研] 281求调剂 +6 Koxui 2026-03-24 7/350 2026-03-26 15:37 by 无际的草原
[考研] 材料与化工328分调剂 +6 。，。，。，。i 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:30 by 418490947
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研经历 +6 cccchenso 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:25 by 544594351
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭