| 查看: 1847 | 回复: 2 | ||
[求助]
T载连不上！
|
| 我的目的片段1630bp，开始扩增目的片段时，第一次用PrimeStar没结果，第二次用KOD有结果，加A尾后成功连T3，测序后结果完全不对，且只测出一端酶切位点，第三次用Hifi有结果，但一直未连上T载，操作步骤完全按照说明书，PCR产物和T3各1μL，水3μL，冰浴30min，42度热激30s，冰上2min，加250μLYEB，37度200转1h，后涂含羧苄的平板，过夜后平板不长菌，已经连了3次了，都是不长菌。PCR产物是胶回收后才连T载的，也尝试过更换感受态（确定未过期）和T3，但都是不长菌。我不理解的是，T3本身也有氨苄抗性，就算是没有连上目的片段是不是也会长的呀？另外如果再连不上的话该怎么办，可否尝试直接连表达载体。请各位指教！万分感谢！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有155人回复
-
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘
已经有1人回复
-
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展
已经有0人回复
-
PROTAC药物开发选择VHL配体：MDK-7526以87%出口向量占有率成首选
已经有0人回复
-
MCC950：NLRP3炎症小体特异性抑制剂的科研应用与前景
已经有0人回复
-
康替唑胺研发17年：如何解决多重耐药菌感染难题
已经有0人回复
-
伊曲莫德（Etrasimod）从“肠道免疫失控”到精准靶向干预
已经有1人回复
-
西达本胺：创新HDAC抑制剂的抗肿瘤之路
已经有0人回复
2楼2017-05-03 13:48:10
3楼2018-04-18 14:30:00