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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » T载连不上！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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孙天阳0304

新虫 (初入文坛)

[求助] T载连不上！

我的目的片段1630bp，开始扩增目的片段时，第一次用PrimeStar没结果，第二次用KOD有结果，加A尾后成功连T3，测序后结果完全不对，且只测出一端酶切位点，第三次用Hifi有结果，但一直未连上T载，操作步骤完全按照说明书，PCR产物和T3各1μL，水3μL，冰浴30min，42度热激30s，冰上2min，加250μLYEB，37度200转1h，后涂含羧苄的平板，过夜后平板不长菌，已经连了3次了，都是不长菌。PCR产物是胶回收后才连T载的，也尝试过更换感受态（确定未过期）和T3，但都是不长菌。我不理解的是，T3本身也有氨苄抗性，就算是没有连上目的片段是不是也会长的呀？另外如果再连不上的话该怎么办，可否尝试直接连表达载体。请各位指教！万分感谢！！
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1楼 2015-07-23 22:38:00
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cclh

新虫 (初入文坛)
我的也是，你的问题解决了吗？

发自小木虫Android客户端
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2楼2017-05-03 13:48:10
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杨小灯123

新虫 (初入文坛)
我做的t1也是这杨，头疼。
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3楼2018-04-18 14:30:00
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