| 查看: 1845 | 回复: 2 | ||
[求助]
T载连不上！
|
| 我的目的片段1630bp，开始扩增目的片段时，第一次用PrimeStar没结果，第二次用KOD有结果，加A尾后成功连T3，测序后结果完全不对，且只测出一端酶切位点，第三次用Hifi有结果，但一直未连上T载，操作步骤完全按照说明书，PCR产物和T3各1μL，水3μL，冰浴30min，42度热激30s，冰上2min，加250μLYEB，37度200转1h，后涂含羧苄的平板，过夜后平板不长菌，已经连了3次了，都是不长菌。PCR产物是胶回收后才连T载的，也尝试过更换感受态（确定未过期）和T3，但都是不长菌。我不理解的是，T3本身也有氨苄抗性，就算是没有连上目的片段是不是也会长的呀？另外如果再连不上的话该怎么办，可否尝试直接连表达载体。请各位指教！万分感谢！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有210人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
-
透明质酸酶的作用机制：如何实现药物递送
已经有0人回复
-
爱思维尔旗下LWT投稿
已经有9人回复
-
替拉扎明为缺氧选择性细胞毒药物研究提供新思路
已经有0人回复
-
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复
2楼2017-05-03 13:48:10
3楼2018-04-18 14:30:00