应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 我的酶完全挂不上Ni柱了，组氨酸都在，可能是什么原因？怎么解决
81/1返回列表
查看: 1218  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

cassie小萍

新虫 (小有名气)

[求助] 我的酶完全挂不上Ni柱了，组氨酸都在，可能是什么原因？怎么解决 已有1人参与

我的酶以前是可以用Ni柱纯化的，但最近完全挂不上柱了，为什么呢？构建序列时我是在C端又加了6个his，重新测序组氨酸都在，可能是什么原因？怎么解决呢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-07-22 19:37:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenyuanli

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cassie小萍: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2015-07-23 10:03:54
完全不挂柱，是因为NI离子与带His标签的目标蛋白之间没有结合能力，从以下几个方面考虑一下试试看，ni柱再生一下或者更换新填料试试（可以尝试用Cu2+柱，结合能力强于Ni2+）、带咪唑的缓冲液是否有问题？酶表达出来后组氨酸标签是否还在？可以做个WB试试。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

cassie小萍
嘻哈哈
2楼2015-07-22 21:49:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaylynlx

新虫 (初入文坛)
向你推荐Cube Biotech 的蛋白纯化介质PureCube Ni-NTA Agarose，结合能力超高，纯化率达70%！
赞一下 回复此楼
3楼2015-07-23 14:53:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cassie小萍

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenyuanli at 2015-07-22 21:49:13
完全不挂柱，是因为NI离子与带His标签的目标蛋白之间没有结合能力，从以下几个方面考虑一下试试看，ni柱再生一下或者更换新填料试试（可以尝试用Cu2+柱，结合能力强于Ni2+）、带咪唑的缓冲液是否有问题？酶表达出来 ...

Lysis buffer: 50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl,10 mM 咪唑
Wash buffer: 50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl,20 mM 咪唑
Elution buffer: 50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl,250 mM 咪唑
请问缓冲液哪里会有问题？
赞一下 回复此楼
4楼2015-07-23 15:31:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cassie小萍

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenyuanli at 2015-07-22 21:49:13
完全不挂柱，是因为NI离子与带His标签的目标蛋白之间没有结合能力，从以下几个方面考虑一下试试看，ni柱再生一下或者更换新填料试试（可以尝试用Cu2+柱，结合能力强于Ni2+）、带咪唑的缓冲液是否有问题？酶表达出来 ...

另请问WB怎么做？
赞一下 回复此楼
5楼2015-07-23 21:02:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flyingsky305

新虫 (小有名气)
将柱子重生一下再过柱。另外不可以N端和C端同时有His tag，否则可能不挂柱

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
6楼2015-07-26 08:46:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenyuanli

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by flyingsky305 at 2015-07-26 08:46:38
将柱子重生一下再过柱。另外不可以N端和C端同时有His tag，否则可能不挂柱

为什么？
回复此楼
嘻哈哈
7楼2015-07-27 11:09:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flyingsky305

新虫 (小有名气)
经验啊。另外有些蛋白自身序列中有His tag，最好表达时不用his tag纯化

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
8楼2015-07-28 12:12:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cassie小萍 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 6/300 2026-11-06 09:03 by 2lRNluKrJpwL
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 9/450 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 07:55 by GBJlw5zzHWpZ
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 05:21 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:21 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:15 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 4/200 2026-11-06 02:37 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭