24小时热门版块排行榜    

查看: 1138  |  回复: 7

cassie小萍

新虫 (小有名气)

[求助] 我的酶完全挂不上Ni柱了,组氨酸都在,可能是什么原因?怎么解决 已有1人参与

我的酶以前是可以用Ni柱纯化的,但最近完全挂不上柱了,为什么呢?构建序列时我是在C端又加了6个his,重新测序组氨酸都在,可能是什么原因?怎么解决呢
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenyuanli

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
cassie小萍: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2015-07-23 10:03:54
完全不挂柱,是因为NI离子与带His标签的目标蛋白之间没有结合能力,从以下几个方面考虑一下试试看,ni柱再生一下或者更换新填料试试(可以尝试用Cu2+柱,结合能力强于Ni2+)、带咪唑的缓冲液是否有问题?酶表达出来后组氨酸标签是否还在?可以做个WB试试。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

嘻哈哈
2楼2015-07-22 21:49:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaylynlx

新虫 (初入文坛)

向你推荐Cube Biotech 的蛋白纯化介质PureCube Ni-NTA Agarose,结合能力超高,纯化率达70%!
3楼2015-07-23 14:53:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cassie小萍

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chenyuanli at 2015-07-22 21:49:13
完全不挂柱,是因为NI离子与带His标签的目标蛋白之间没有结合能力,从以下几个方面考虑一下试试看,ni柱再生一下或者更换新填料试试(可以尝试用Cu2+柱,结合能力强于Ni2+)、带咪唑的缓冲液是否有问题?酶表达出来 ...

Lysis buffer: 50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl,10 mM 咪唑
Wash buffer: 50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl,20 mM 咪唑
Elution buffer: 50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl,250 mM 咪唑
请问缓冲液哪里会有问题?
4楼2015-07-23 15:31:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cassie小萍

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenyuanli at 2015-07-22 21:49:13
完全不挂柱,是因为NI离子与带His标签的目标蛋白之间没有结合能力,从以下几个方面考虑一下试试看,ni柱再生一下或者更换新填料试试(可以尝试用Cu2+柱,结合能力强于Ni2+)、带咪唑的缓冲液是否有问题?酶表达出来 ...

另请问WB怎么做?
5楼2015-07-23 21:02:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flyingsky305

新虫 (小有名气)

将柱子重生一下再过柱。另外不可以N端和C端同时有His tag,否则可能不挂柱

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2015-07-26 08:46:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenyuanli

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by flyingsky305 at 2015-07-26 08:46:38
将柱子重生一下再过柱。另外不可以N端和C端同时有His tag,否则可能不挂柱

为什么?
嘻哈哈
7楼2015-07-27 11:09:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flyingsky305

新虫 (小有名气)

经验啊。另外有些蛋白自身序列中有His tag,最好表达时不用his tag纯化

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2015-07-28 12:12:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cassie小萍 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 7/350 2026-08-21 12:15 by weiyin
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +15 archvillain 2026-08-15 27/1350 2026-08-21 11:32 by tim76
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
请填处理意见