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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zhufy

铁虫 (初入文坛)

[交流] pet-28a表达蛋白分子量变小???

我在用pet-28a表达一蛋白时,后面检测它的分子量变小了(应该40KD,现在只有25KD左右),请问哪位同仁知道这是什么原因???
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humants

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
我感觉这不该载体是,很有可能:
1.你的基因在pcr是碱基错配产生了,意外的终止子,不知道你测序了没?
2.可能是你的基因中有连续的3-5个的大肠杆菌稀有密码子,导致表达中止,你先去下面的网站做一下密码子偏好分析:http://www.bio-soft.net/sms/
   若是1的原因只能重做PCR,换成高保真的taq。
   若是2的原因可以尝试
       a.降低发酵温度让他表达的慢一点,也许会表达全。
       b.换一下菌株换成Rosetta系列的,可以补充稀有密码子。


希望能给你帮助。
2楼2008-08-07 10:01:21
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jasco

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by humants at 2008-8-7 10:01:
我感觉这不该载体是,很有可能:
1.你的基因在pcr是碱基错配产生了,意外的终止子,不知道你测序了没?
2.可能是你的基因中有连续的3-5个的大肠杆菌稀有密码子,导致表达中止,你先去下面的网站做一下密码子偏好 ...

完全同意,基本就是这两种原因了,
3楼2008-08-07 10:48:19
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

还有蛋白出现降解的可能,这对于表达出来的蛋白是很有可能的。可以在不同的诱导表达时间分别取样电泳,或者降低表达温度来实验。
金币是赌出来的
4楼2008-08-07 11:49:11
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