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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » pet-28a表达蛋白分子量变小？？？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zhufy

铁虫 (初入文坛)

[交流] pet-28a表达蛋白分子量变小？？？

我在用pet-28a表达一蛋白时，后面检测它的分子量变小了（应该40KD，现在只有25KD左右），请问哪位同仁知道这是什么原因？？？
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1楼 2008-08-07 09:35:09
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humants

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
我感觉这不该载体是，很有可能：
1.你的基因在pcr是碱基错配产生了，意外的终止子，不知道你测序了没？
2.可能是你的基因中有连续的3-5个的大肠杆菌稀有密码子，导致表达中止，你先去下面的网站做一下密码子偏好分析：http://www.bio-soft.net/sms/。
   若是1的原因只能重做PCR，换成高保真的taq。
   若是2的原因可以尝试
       a.降低发酵温度让他表达的慢一点，也许会表达全。
       b.换一下菌株换成Rosetta系列的，可以补充稀有密码子。


希望能给你帮助。
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2楼2008-08-07 10:01:21
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jasco

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by humants at 2008-8-7 10:01:
我感觉这不该载体是，很有可能：
1.你的基因在pcr是碱基错配产生了，意外的终止子，不知道你测序了没？
2.可能是你的基因中有连续的3-5个的大肠杆菌稀有密码子，导致表达中止，你先去下面的网站做一下密码子偏好 ...

完全同意，基本就是这两种原因了，
赞一下 回复此楼
3楼2008-08-07 10:48:19
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
还有蛋白出现降解的可能，这对于表达出来的蛋白是很有可能的。可以在不同的诱导表达时间分别取样电泳，或者降低表达温度来实验。
赞一下 回复此楼
金币是赌出来的
4楼2008-08-07 11:49:11
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