应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 乳酸菌同源重组基因敲除PCR验证求救
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1828  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ankey呦

新虫 (初入文坛)

[求助] 乳酸菌同源重组基因敲除PCR验证求救 已有2人参与

本人做乳酸菌基因敲除，采用同源重组方法，敲除目的基因的同时引入抗性基因，筛选到了一株疑似突变菌，但在pcr验证基因组时，总是既出现突变后的条带3400bp，也有正常菌的条带2800bp，即使纯化四代了提取基因组也一样，而正常菌只有2800，有高手前辈明白原因么？是菌还是不纯？还是菌能够自己修复回原来的基因？急求前辈指点啊！谢谢！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

敲除验证

» 猜你喜欢
1楼 2015-07-19 12:31:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangtzelv

新虫 (小有名气)
可能同源整合到了其它位点。
赞一下 回复此楼
6楼2015-12-18 15:45:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

红塔山和云烟

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
ankey呦(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-19 20:06:25
楼主应当将PCR鉴定引物设置在你的目的基因外，如果鉴定引物是与你的目的基因互搭的话就会出现楼主上述的情况（即扩增出重组后的条带，也有原始长度的条带），希望能帮助到你
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-07-19 14:47:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ankey呦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 红塔山和云烟 at 2015-07-19 14:47:26
楼主应当将PCR鉴定引物设置在你的目的基因外，如果鉴定引物是与你的目的基因互搭的话就会出现楼主上述的情况（即扩增出重组后的条带，也有原始长度的条带），希望能帮助到你

非常感谢您的帮助，目前我的引物就是设计在同源臂外侧的基因组上的，如果未突变应该不会有3400的条带啊，只是不明白为什么每次挑取单菌落培养后的菌PCR既有突变的3400又有正常菌的2800？能指点下吗？谢谢！
赞一下 回复此楼
3楼2015-07-19 16:44:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

红塔山和云烟

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
ankey呦: 金币+4, ★有帮助, 非常感谢您的建议 2015-07-20 09:15:16
引用回帖:
3楼: Originally posted by ankey呦 at 2015-07-19 16:44:50
非常感谢您的帮助，目前我的引物就是设计在同源臂外侧的基因组上的，如果未突变应该不会有3400的条带啊，只是不明白为什么每次挑取单菌落培养后的菌PCR既有突变的3400又有正常菌的2800？能指点下吗？谢谢！...

这种情况在大肠杆菌里也遇到过，楼主可以试试回收3400的片段 然后送去测序一下 如果测序结果表明突变成功应该就没有问题 也有可能没挑到单菌落.

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2015-07-19 20:33:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856，材料与化工321分求调剂 +7 大馋小子 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:31 by 无际的草原
[考研] 085600，材料与化工321分，求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 22408 359分调剂 +3 Qshers 2026-03-27 3/150 2026-03-27 12:22 by wxiongid
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 327求调剂 +7 prayer13 2026-03-23 7/350 2026-03-26 20:48 by 不吃魚的貓
[考研] 324求调剂 +4 wysyjs25 2026-03-21 4/200 2026-03-26 20:38 by fmesaito
[考研] 一志愿厦门大学化学学硕307求调剂 +8 y7czhao 2026-03-26 8/400 2026-03-26 19:51 by 不吃魚的貓
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 生物学学硕，一志愿湖南大学，初试成绩338 +4 YYYYYNNNNN 2026-03-26 4/200 2026-03-26 19:00 by macy2011
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +6 谷雨上岸 2026-03-23 7/350 2026-03-26 18:55 by 不吃魚的貓
[考研] 297求调剂 +6 田洪有 2026-03-26 6/300 2026-03-26 15:55 by 不吃魚的貓
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 打过很多竞赛，085406控制工程300分，求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-24 3/150 2026-03-24 21:31 by peike
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭