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ankey呦

新虫 (初入文坛)

[求助] 乳酸菌同源重组基因敲除PCR验证求救已有2人参与

本人做乳酸菌基因敲除,采用同源重组方法,敲除目的基因的同时引入抗性基因,筛选到了一株疑似突变菌,但在pcr验证基因组时,总是既出现突变后的条带3400bp,也有正常菌的条带2800bp,即使纯化四代了提取基因组也一样,而正常菌只有2800,有高手前辈明白原因么?是菌还是不纯?还是菌能够自己修复回原来的基因?急求前辈指点啊!谢谢!
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ankey呦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 红塔山和云烟 at 2015-07-19 14:47:26
楼主应当将PCR鉴定引物设置在你的目的基因外,如果鉴定引物是与你的目的基因互搭的话就会出现楼主上述的情况(即扩增出重组后的条带,也有原始长度的条带),希望能帮助到你

非常感谢您的帮助,目前我的引物就是设计在同源臂外侧的基因组上的,如果未突变应该不会有3400的条带啊,只是不明白为什么每次挑取单菌落培养后的菌PCR既有突变的3400又有正常菌的2800?能指点下吗?谢谢!
3楼2015-07-19 16:44:50
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