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liandongqq

银虫 (初入文坛)

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虫号: 2506704

[交流] 免疫组化片子有污染物，求助

本人近期做免疫组化实验，做人的片子在显色之后总是有污染物，内源性过氧化物酶使用双氧水灭活，封闭使用5%的BSA。每步都有PBS清洗，洗完之后再用清水洗一遍。在同一批实验中只有人的有这个污染物，也不是每张人的片子都有，实在是想不通原因，来这里求助大神。
实验步骤简单的描述下：1，切片，烤片60℃，1-2h；
2，脱蜡及复水
二甲苯10min，100％乙醇10min，95％乙醇10min，90％乙醇10min，85％乙醇10min，80％乙醇10min， 75％乙醇10min，纯水10分钟，
3.微波修复
将切片浸入0.01M枸橼酸缓冲液，微波中最大火力（98℃-100℃）加热至沸腾，冷却（约5-10min），反复两次；
4.将切片自然冷却至室温，PBS洗涤3次，每次5min；
5.封闭，5％BSA，室温20min，甩去多余液体；
6.滴加一抗，37℃，1h，或者4℃过夜；
7.PBS洗涤3次，每次3min；
8.滴加二抗，4℃，60min；
9.PBS洗涤3次，每次5min；
10.DAB显色剂配置好后，滴加于切片，室温，镜下检测反应时间（约5min）；
11.自来水冲洗干净，过蒸馏水；
12.苏木素复染2min，自来水冲洗；
13.脱水
70％乙醇10min，80％乙醇10min，90％乙醇10min，95％乙醇10min，100％乙醇10min，二甲苯30min；
14.树胶封片，镜检。

肾 (2).jpg