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liandongqq

银虫 (初入文坛)


[交流] 免疫组化片子有污染物,求助

本人近期做免疫组化实验,做人的片子在显色之后总是有污染物,内源性过氧化物酶使用双氧水灭活,封闭使用5%的BSA。每步都有PBS清洗,洗完之后再用清水洗一遍。在同一批实验中只有人的有这个污染物,也不是每张人的片子都有,实在是想不通原因,来这里求助大神。
实验步骤简单的描述下:1,切片,烤片60℃,1-2h;
2,脱蜡及复水
二甲苯10min,100%乙醇10min,95%乙醇10min,90%乙醇10min,85%乙醇10min,80%乙醇10min, 75%乙醇10min,纯水10分钟,
3.微波修复
将切片浸入0.01M枸橼酸缓冲液,微波中最大火力(98℃-100℃)加热至沸腾,冷却(约5-10min),反复两次;
4.将切片自然冷却至室温,PBS洗涤3次,每次5min;
5.封闭,5%BSA,室温20min,甩去多余液体;
6.滴加一抗,37℃,1h,或者4℃过夜;
7.PBS洗涤3次,每次3min;
8.滴加二抗,4℃,60min;
9.PBS洗涤3次,每次5min;
10.DAB显色剂配置好后,滴加于切片,室温,镜下检测反应时间(约5min);
11.自来水冲洗干净,过蒸馏水;
12.苏木素复染2min,自来水冲洗;
13.脱水
70%乙醇10min,80%乙醇10min,90%乙醇10min,95%乙醇10min,100%乙醇10min,二甲苯30min;
14.树胶封片,镜检。

免疫组化片子有污染物,求助
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免疫组化片子有污染物,求助-1
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免疫组化片子有污染物,求助-2
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liandongqq

银虫 (初入文坛)


引用回帖:
33楼: Originally posted by zxfann at 2015-07-17 16:35:24
目测应该是蜡没有脱干净

谢谢,我想是不是切片的制作过程中被污染了
34楼2015-07-17 17:32:25
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liandongqq

银虫 (初入文坛)


亲们,就没有一个人出来解释吗?都是来捞金的?
7楼2015-07-17 15:12:42
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