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444565008qq

新虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量pcr已有3人参与

马上要做荧光定量pcr，我都应该准备什么，提前做什么预实验，还有扩增效率是什么意思，新手，不懂，请指点。
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1楼2015-07-16 13:18:52
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fay0427

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
444565008qq: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-07-17 12:56:04
我最近也在准备做荧光定量PCR，查了很多的相关资料~不知道你的具体情况是什么，按照我的来说应该是准备样品提取RNA-反转录为cDNA-再开始荧光定量，你所说的扩增效率是通过梯度稀释试验获得的，因为只有在一定范围内的扩增效率才是有效的，建议你多看看关于荧光定量PCR的基础知识，希望有所帮助
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加油！
2楼2015-07-16 15:08:34
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vivd娟

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
444565008qq: 金币+5 2015-07-17 12:56:16
准备的东西不少，如果是要直接买试剂盒的话，什么都方便了
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3楼2015-07-16 16:57:25
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444565008qq

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fay0427 at 2015-07-16 15:08:34
我最近也在准备做荧光定量PCR，查了很多的相关资料~不知道你的具体情况是什么，按照我的来说应该是准备样品提取RNA-反转录为cDNA-再开始荧光定量，你所说的扩增效率是通过梯度稀释试验获得的，因为只有在一定范围内 ...

谢谢
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4楼2015-07-17 12:55:42
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444565008qq

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fay0427 at 2015-07-16 15:08:34
我最近也在准备做荧光定量PCR，查了很多的相关资料~不知道你的具体情况是什么，按照我的来说应该是准备样品提取RNA-反转录为cDNA-再开始荧光定量，你所说的扩增效率是通过梯度稀释试验获得的，因为只有在一定范围内 ...

反转录做完了，就是不太知道荧光怎么做， 谢谢，我会多看看资料
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5楼2015-07-17 12:57:27
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q120465872

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
444565008qq: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-10-08 13:50:34
最好先拿几个样做下预实验确定下条件。引物质量和片段大小这些都要自己心里有底，然后根据试剂盒提供的参考条件优化自己的实验。
扩增效率通过梯度稀释模板计算，越接近100%肯定越好，上下一定范围则根据具体情况确定（如具体微生物类群定量这种，对扩增效率要求非常低，80%多都被认可，但是具体某个基因表达量差异这种，要求相对高一些）。
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赐予我力量，去改变我所能改变的；赐予我勇气，去接受我所不能改变的；并赐予我智慧，去分辨这两者。
6楼2015-10-08 10:23:16
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