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444565008qq

新虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量pcr已有3人参与

马上要做荧光定量pcr,我都应该准备什么,提前做什么预实验,还有扩增效率是什么意思,新手,不懂,请指点。
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q120465872

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
444565008qq: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-10-08 13:50:34
最好先拿几个样做下预实验确定下条件。引物质量和片段大小这些都要自己心里有底,然后根据试剂盒提供的参考条件优化自己的实验。
扩增效率通过梯度稀释模板计算,越接近100%肯定越好,上下一定范围则根据具体情况确定(如具体微生物类群定量这种,对扩增效率要求非常低,80%多都被认可,但是具体某个基因表达量差异这种,要求相对高一些)。
赐予我力量,去改变我所能改变的;赐予我勇气,去接受我所不能改变的;并赐予我智慧,去分辨这两者。
6楼2015-10-08 10:23:16
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