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[求助]
拜托 拜托啦~~~用紫外分光光度法测试水中蛋白质含量 已有1人参与
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紫外分光光度法测试水中蛋白质含量，有哪位高人测过的。求指教    |
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4楼2015-07-22 20:43:10
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
雯雯123321: 金币+5 2015-07-22 20:41:16
感谢参与，应助指数 +1
雯雯123321: 金币+5 2015-07-22 20:41:16
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一、实验目的 学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理; 掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术; 掌握紫外分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。 二、实验原理 蛋白质分子中含有酪氨酸、色氨酸及苯丙氨酸残基，它们的结构中具有共轭双链，对紫外光有吸收作用，其最大值在280nm波长处。在此波长附近， 蛋白质溶液的光吸收值与其含量（范围是0.1~1.0mg/ml）成正比，因此，280nm的吸光度可用作蛋白质的定量测定。但不同种的蛋白质对280nm波长的光吸收强度因芳香性氨基酸残基含量的不同而有差异，因此需用同种蛋白质作对照，结果才可靠。在半定量测定和纯蛋白的定量测定时，可用280nm的光吸收法。此外，部分纯化的蛋白质常含有核酸，核酸、核苷酸和碱基等物质在紫外区也有强的光吸收，常与蛋白质类相互干扰。但二者的紫外吸收特性不一样，由于核酸类物质在260nm有最大吸收值，因此，可利用蛋白质280nm和260nm的吸收差法来测定计算蛋白质浓度。紫外吸收法操作简便快捷，不消耗样品，低浓度的盐类不干扰测定，在蛋白质和酶的生化制备及其它研究中应用广泛，尤其是适合于柱层析分离中蛋白质洗脱情况的检测。 三、实验器材 1．标准酪蛋白：配制成浓度为1mg/ml的溶液。 2．待测蛋白质溶液：稀释100倍的蛋白质溶液。 3. 紫外分光光度计 4.试管和试管架 5.移液管 四、实验步骤 （1）标准曲线的绘制: 取8支干净试管，编号后按下表加入试剂 试 剂 管号 1 2 3 4 5 6 7 水 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0.0 2.5 标准酪蛋白 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 0.0 血清 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 2.5 A280 加毕，混匀，用紫外分光光度计测A280，以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标作图。 （2）样液测定 取未知浓度的蛋白质样液按上述方法测定A280，对照标准曲线求得蛋白质浓度。 五、实验结果 管号 1 2 3 4 5 6 7 蛋白浓度mg/ml 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 A280 0.000 0.174 0.350 0.519 0.687 0.853 0.449 蛋白质标准曲线 y = 0.8585xR2 = 0.9998 00.20.40.60.8 10 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 蛋白质浓度 A280 由上图可知，标准曲线的方程为y = 0.8585x，将y=0.449带入方程得，x=0.523mg/ml，因为样品已经稀释100倍，所以样品浓度为52.3mg/ml。 |
2楼2015-07-16 20:02:30
3楼2015-07-16 20:04:19
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