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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 双酶切问题
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紫漠清扬

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切问题 已有2人参与

各位大神，用thermo的快切酶BamH1 和 takala 的慢切酶Not1 对重组载体做双酶切处理，另外还要用一快切酶（与BamH1条件相同）做载体粉碎，请问buffer如何选，时间如何确定？在线等~
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1楼 2015-07-16 09:45:04
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忘忧草_

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
thermo的快切酶绝大部分的buffer不是通用吗
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不将就
2楼2015-07-16 10:49:14
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hottest-jia

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
快切酶的buffer理论上是相同的啊，不能确定的话你可以做两个坐下对照呗，希望可以帮到你
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3楼2015-07-16 16:39:55
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紫漠清扬

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 忘忧草_ at 2015-07-16 10:49:14
thermo的快切酶绝大部分的buffer不是通用吗

谢谢，快切酶的buffer是通用的。可是我做双酶切用的一个是快切酶，一个是慢切酶，来自不同公司，没有通用buffer。
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4楼2015-07-17 10:03:25
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紫漠清扬

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hottest-jia at 2015-07-16 16:39:55
快切酶的buffer理论上是相同的啊，不能确定的话你可以做两个坐下对照呗，希望可以帮到你

是，我做载体粉碎用的是快切酶。双酶切一个用快切，一个慢切
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5楼2015-07-17 10:05:01
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紫漠清扬

新虫 (初入文坛)
问题解决～我用快切酶先切，切完后灭活酶，然后用慢切酶切--加慢切酶buffer。切完跑胶，目的条带亮亮哒～～

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2015-07-18 16:59:46
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