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zgnykxylssdh铁虫 (初入文坛)
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克隆问题 已有3人参与
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我的目的片段2900bp，用PCR扩增后非常亮，将PCR产物酶切XhoI 和Bsal，是先用Xhol，而后用Bsal酶切的； 载体也是同样的方法酶切，即先用XhoI而后用BsaI酶切的。 载体和目的片段酶切回收后，都经电泳鉴定，都为单一的一条带，大小合适，无杂带。 载体和目的片段连接，转化（转化所用感受态为DH5a），克隆，筛选阳性，一直筛选不出来。 后来，筛出两个克隆，但经测序后，目的片段反向插入，并且目的片段部分插入 请问这是什么原因造成的？急急急！ |
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