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zgnykxylssdh铁虫 (初入文坛)
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克隆问题已有3人参与
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我的目的片段2900bp,用PCR扩增后非常亮,将PCR产物酶切XhoI 和Bsal,是先用Xhol,而后用Bsal酶切的; 载体也是同样的方法酶切,即先用XhoI而后用BsaI酶切的。 载体和目的片段酶切回收后,都经电泳鉴定,都为单一的一条带,大小合适,无杂带。 载体和目的片段连接,转化(转化所用感受态为DH5a),克隆,筛选阳性,一直筛选不出来。 后来,筛出两个克隆,但经测序后,目的片段反向插入,并且目的片段部分插入 请问这是什么原因造成的?急急急! |
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2楼2015-07-09 10:52:00
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7楼2015-07-10 08:26:13
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